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xiongdian鐵蟲 (初入文壇)
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[交流]
RNA提取TRIZOL法最關(guān)鍵的注意步驟是什么 已有17人參與
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| 因?yàn)楸救颂崛NA經(jīng)常降解，所以想請(qǐng)教大家到底那一步是最容易造成RNA降解的哦 |
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小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
scelab(金幣+5): 謝謝回復(fù)哦~ 2012-01-14 14:10:11
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總RNA的提�。═rizol法提�。� 在收集到生物材料之后，最好能即刻進(jìn)行RNA制備工作。若需暫時(shí)儲(chǔ)存，則應(yīng)以液氮將生物材料急速冷凍后，儲(chǔ)存于-80℃冷凍柜。在制備RNA時(shí)，將儲(chǔ)存于冷凍柜的材料取出，立即以加入液氮研磨的方式打破細(xì)胞，不可以先行解凍，以避免RNase的作用。 1. 提取組織RNA時(shí)，每50～100mg組織用1ml Trizol試劑對(duì)組織進(jìn)行裂解；提取細(xì)胞RNA時(shí)，先離心沉淀細(xì)胞，每5-10 ╳106個(gè)細(xì)胞加1ml Trizol后，反復(fù)用槍吹打或劇烈振蕩以裂解細(xì)胞； 2. 將上述組織或細(xì)胞的Trizol裂解液轉(zhuǎn)入EP管中,在室溫15~30C下放置5分鐘； 3. 在上述EP管中，按照每1ml TRIZOL加0.2ml氯仿的量加入氯仿，蓋上EP管蓋子，在手中用力震蕩15秒，在室溫下（15℃～30℃）放置2～3分鐘后，12000g（2℃～8℃）離心15分鐘； 4. 取上層水相置于新EP管中,按照每1ml TRIZOL加0.5ml異丙醇的量加入異丙醇，在室溫下（15℃～30℃）放置10分鐘,12000g（2℃～8℃）離心10分鐘； 5. 棄上清，按照每1ml TRIZOL加1ml 75%乙醇進(jìn)行洗滌，渦旋混合，7500g（2℃～8℃）離心5分鐘，棄上清； 6. 讓沉淀的RNA在室溫下自然干燥； 7. 用Rnase-free water 溶解RNA沉淀。 |
9樓2012-01-14 13:52:33
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