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xiongdian鐵蟲 (初入文壇)
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RNA提取TRIZOL法最關(guān)鍵的注意步驟是什么 已有17人參與
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| 因?yàn)楸救颂崛NA經(jīng)常降解,所以想請教大家到底那一步是最容易造成RNA降解的哦 |
銅蟲 (正式寫手)
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總RNA的提。═rizol法提。 在收集到生物材料之后,最好能即刻進(jìn)行RNA制備工作。若需暫時儲存,則應(yīng)以液氮將生物材料急速冷凍后,儲存于-80℃冷凍柜。在制備RNA時,將儲存于冷凍柜的材料取出,立即以加入液氮研磨的方式打破細(xì)胞,不可以先行解凍,以避免RNase的作用。 1. 提取組織RNA時,每50~100mg組織用1ml Trizol試劑對組織進(jìn)行裂解;提取細(xì)胞RNA時,先離心沉淀細(xì)胞,每5-10 ╳106個細(xì)胞加1ml Trizol后,反復(fù)用槍吹打或劇烈振蕩以裂解細(xì)胞; 2. 將上述組織或細(xì)胞的Trizol裂解液轉(zhuǎn)入EP管中,在室溫15~30C下放置5分鐘; 3. 在上述EP管中,按照每1ml TRIZOL加0.2ml氯仿的量加入氯仿,蓋上EP管蓋子,在手中用力震蕩15秒,在室溫下(15℃~30℃)放置2~3分鐘后,12000g(2℃~8℃)離心15分鐘; 4. 取上層水相置于新EP管中,按照每1ml TRIZOL加0.5ml異丙醇的量加入異丙醇,在室溫下(15℃~30℃)放置10分鐘,12000g(2℃~8℃)離心10分鐘; 5. 棄上清,按照每1ml TRIZOL加1ml 75%乙醇進(jìn)行洗滌,渦旋混合,7500g(2℃~8℃)離心5分鐘,棄上清; 6. 讓沉淀的RNA在室溫下自然干燥; 7. 用Rnase-free water 溶解RNA沉淀。 |
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