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[交流] 熒光的測定

有專門研究熒光的嗎，我是剛開始接觸熒光的，想請教你們幾個問題，
1.如何確定最大激發(fā)波長和發(fā)射波長
2。最大激發(fā)波長可以通過紫外最大吸收波長確定嗎？
3，激發(fā)譜圖和發(fā)射譜圖是如何做出來的，具體一點哦

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1樓 2011-12-10 12:29:47

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張淼

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sxdwxx(金幣+1):謝謝參與
sxdwxx(金幣+1): 2011-12-10 19:10:36
padodo(金幣+3): 感謝應(yīng)助！ 2011-12-12 16:11:30

熒光涉及光的吸收和發(fā)射兩個過程，因此任何熒光化合物，都有兩種特征的光譜：激發(fā)光譜(exitation spectrum)和發(fā)射光譜(emission spectrum)。

熒光屬于光致發(fā)光，需選擇合適的激發(fā)光波長(Ex)以利于檢測。激發(fā)波長可通過熒光化合物的激發(fā)光譜來確定。激發(fā)光譜的具體檢測辦法是通過掃描激發(fā)單色器，使不同波長的入射光激發(fā)熒光化合物，產(chǎn)生的熒光通過固定波長的發(fā)射單色器，由光檢測元件檢測。最終得到熒光強度對激發(fā)波長的關(guān)系曲線就是激發(fā)光譜。在激發(fā)光譜曲線的最大波長處，處于激發(fā)態(tài)的分子數(shù)目最多，即所吸收的光能量也最多，能產(chǎn)生最強的熒光。當(dāng)考慮靈敏度時，測定應(yīng)選擇最大激發(fā)波長。

一般所說的熒光光譜，實際上僅指熒光發(fā)射光譜。它是在激發(fā)單色器波長固定時，發(fā)射單色器進行波長掃描所得的熒光強度隨熒光波長(即發(fā)射波長，Em)變化的曲線。熒光光譜可供鑒別熒光物質(zhì)，并作為熒光測定時選擇合適的測定波長的依據(jù)。

另外，由于熒光測量儀器的特性，使光源的能量分布、單色器的透射率和檢測器的響應(yīng)等性能會隨波長而變，所以同一化合物在不同的儀器上會得到不同的光譜圖，且彼此間無類比性，這種光譜稱為表觀光譜。要使同一化合物在不同的儀器上能得到具有相同特性的熒光光譜，則需要對儀器的上述特性進行校正。經(jīng)過校正的光譜稱為真正的熒光光譜。

激發(fā)波長和發(fā)射波長是熒光檢測的必要參數(shù)。選擇合適的激發(fā)波長和發(fā)射波長，對檢測的靈敏度和選擇性都很重要，尤其是可以較大程度地提高檢測靈敏度。

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2樓2011-12-10 12:55:11

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chaoyu

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sxdwxx(金幣+1):謝謝參與
sxdwxx(金幣+1): 2011-12-10 19:10:25
padodo(金幣+3): 感謝應(yīng)助！ 2011-12-12 16:11:45

我的辦法就是，設(shè)一個常用的激發(fā)，如300nm，掃發(fā)射峰。根據(jù)發(fā)射峰再掃激發(fā)峰，這個激發(fā)峰位置就是對的了，然后再掃發(fā)射，得到對的發(fā)射峰。
熒光跟紫外，有的能對上，有的有偏差，不好比。
至于作圖，導(dǎo)出ASC碼文件用origin做。

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4樓2011-12-10 17:01:03

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水孩子

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小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖
padodo(金幣+3): 感謝應(yīng)助！ 2011-12-12 16:12:00

引用回帖:

4樓: Originally posted by chaoyu at 2011-12-10 17:01:03:
我的辦法就是，設(shè)一個常用的激發(fā)，如300nm，掃發(fā)射峰。根據(jù)發(fā)射峰再掃激發(fā)峰，這個激發(fā)峰位置就是對的了，然后再掃發(fā)射，得到對的發(fā)射峰。
熒光跟紫外，有的能對上，有的有偏差，不好比。
至于作圖，導(dǎo)出ASC碼文 ...

我也是初學(xué)者，最近摸了一點點

找激發(fā)的方法：固定發(fā)射波長，如200,全波長范圍掃描激發(fā)波長；
再固定發(fā)射波長，如210，或者220，全波長范圍掃激發(fā)波長，
幾次掃描下來，位置固定不變的峰就是激發(fā)波長了。
為什么用紫外，因為紫外強度大，掃出來的峰強度會比其他頻率掃出來的要明顯些。

用紫外吸收確定激發(fā)波長的方法，有不準(zhǔn)確的時候，不是十分贊同。。。。

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5樓2011-12-12 07:58:16

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小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖

什么叫具體一點？！呵呵，這個只能邊操作邊遇到問題再來問，具體問題具體對待了。。。

我做了2個月多，問題不是一般的多，

加油吧！

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6樓2011-12-12 08:00:42

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nisang

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小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖

我最近也做了點熒光，小問題是層出不窮。周邊沒人懂，啥都得自己摸索。煩死。

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7樓2011-12-12 10:47:50

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mikeliubao

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小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖

一些儀器上有prescan，就可以知道大概最大激發(fā)與最大發(fā)射，然后，根據(jù)它推薦的最大激發(fā)，掃描發(fā)射光譜（熒光光譜），確定最大發(fā)射接著反過來，根據(jù)得到的最大發(fā)射，掃描激發(fā)光譜，的最大激發(fā)。

另外i，要注意倍頻峰、二級吸收峰是比較尖銳的，強度也是比較大的。要扣除這些峰。

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8樓2011-12-12 16:38:23

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簡單回復(fù)

zhoupeng873樓

2011-12-10 13:29 回復(fù)

sxdwxx(金幣+1):謝謝參與

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