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[交流]
熒光的測定
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有專門研究熒光的嗎,我是剛開始接觸熒光的,想請教你們幾個(gè)問題, 1.如何確定最大激發(fā)波長和發(fā)射波長 2。最大激發(fā)波長可以通過紫外最大吸收波長確定嗎? 3,激發(fā)譜圖和發(fā)射譜圖是如何做出來的,具體一點(diǎn)哦 |
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熒光涉及光的吸收和發(fā)射兩個(gè)過程,因此任何熒光化合物,都有兩種特征的光譜:激發(fā)光譜(exitation spectrum)和發(fā)射光譜(emission spectrum)。 熒光屬于光致發(fā)光,需選擇合適的激發(fā)光波長(Ex)以利于檢測。激發(fā)波長可通過熒光化合物的激發(fā)光譜來確定。激發(fā)光譜的具體檢測辦法是通過掃描激發(fā)單色器,使不同波長的入射光激發(fā)熒光化合物,產(chǎn)生的熒光通過固定波長的發(fā)射單色器,由光檢測元件檢測。最終得到熒光強(qiáng)度對激發(fā)波長的關(guān)系曲線就是激發(fā)光譜。在激發(fā)光譜曲線的最大波長處,處于激發(fā)態(tài)的分子數(shù)目最多,即所吸收的光能量也最多,能產(chǎn)生最強(qiáng)的熒光。當(dāng)考慮靈敏度時(shí),測定應(yīng)選擇最大激發(fā)波長。 一般所說的熒光光譜,實(shí)際上僅指熒光發(fā)射光譜。它是在激發(fā)單色器波長固定時(shí),發(fā)射單色器進(jìn)行波長掃描所得的熒光強(qiáng)度隨熒光波長(即發(fā)射波長,Em)變化的曲線。熒光光譜可供鑒別熒光物質(zhì),并作為熒光測定時(shí)選擇合適的測定波長的依據(jù)。 另外,由于熒光測量儀器的特性,使光源的能量分布、單色器的透射率和檢測器的響應(yīng)等性能會隨波長而變,所以同一化合物在不同的儀器上會得到不同的光譜圖,且彼此間無類比性,這種光譜稱為表觀光譜。要使同一化合物在不同的儀器上能得到具有相同特性的熒光光譜,則需要對儀器的上述特性進(jìn)行校正。經(jīng)過校正的光譜稱為真正的熒光光譜。 激發(fā)波長和發(fā)射波長是熒光檢測的必要參數(shù)。選擇合適的激發(fā)波長和發(fā)射波長,對檢測的靈敏度和選擇性都很重要,尤其是可以較大程度地提高檢測靈敏度。 |
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我也是初學(xué)者,最近摸了一點(diǎn)點(diǎn) 找激發(fā)的方法:固定發(fā)射波長,如200,全波長范圍掃描激發(fā)波長; 再固定發(fā)射波長,如210,或者220,全波長范圍掃激發(fā)波長, 幾次掃描下來,位置固定不變的峰就是激發(fā)波長了。 為什么用紫外,因?yàn)樽贤鈴?qiáng)度大,掃出來的峰強(qiáng)度會比其他頻率掃出來的要明顯些。 用紫外吸收確定激發(fā)波長的方法,有不準(zhǔn)確的時(shí)候,不是十分贊同。。。。 |
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