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[求助] 【求助】材料上的細胞SEM觀察

最近要做材料上的細胞的SEM觀察，我們組之前都是戊二醛固定后酒精脫水然后自然風干就去看電鏡了，不過我看別人都有干燥的過程，我想用叔丁醇冷凍干燥，但是在抽真空的過程對細胞有損傷么？會不會把貼附的細胞抽下來呢？應該不會吧。。。大家有這方面經驗么？
另外我想問一下不透明的材料上的細胞經染色后能用倒置光學顯微鏡看么？效果如何呢？

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1樓 2011-12-15 23:52:28

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lixiangde(金幣+1): 感謝回帖交流 2011-12-16 23:18:36
liu-xj10(金幣+5): 謝謝交流~ 2011-12-20 13:54:54

SEM不是要噴晶嗎？
那個不傷害細胞？
凍干是升華，不怎么傷害細胞的

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2樓2011-12-15 23:59:59

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引用回帖:

樓: Originally posted by 紅舟流星 at 2011-12-15 23:59:59:
SEM不是要噴晶嗎？
那個不傷害細胞？
凍干是升華，不怎么傷害細胞的

謝謝
我是怕抽真空的時候會對細胞有影響，到達真空度后應該沒事了。他們之前做掃描都是自然干燥的，我還是想用叔丁醇用凍干的方法做。

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3樓2011-12-16 00:06:01

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紅舟流星

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lixiangde(金幣+1): 感謝回帖交流 2011-12-16 23:18:46

引用回帖:

3樓: Originally posted by liu-xj10 at 2011-12-16 00:06:01:
謝謝
我是怕抽真空的時候會對細胞有影響，到達真空度后應該沒事了。他們之前做掃描都是自然干燥的，我還是想用叔丁醇用凍干的方法做。

試試材料浸沒在溶劑中然后液氮，然后凍干

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4樓2011-12-16 00:39:26

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lixiangde(金幣+1): 感謝回帖交流 2011-12-16 23:18:55
liu-xj10(金幣+5): 感謝回復。。。金幣太少，見諒。。 2011-12-20 13:57:18

看細胞這類生物樣品建議還是用環(huán)掃吧，對細胞形態(tài)影響小一些

說實話，SEM這類需要脫水的儀器本身并不適合看細胞

有條件的話還是熒光染色吧

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能攻心則反側自消，從古知兵非好戰(zhàn)；不審勢即寬嚴皆誤，后來治蜀要深思

5樓2011-12-16 19:19:30

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lixiangde(金幣+1): 感謝回帖交流 2011-12-17 18:19:50

之前抽真空干燥過，感覺沒什么影響。
不透光的材料用一般的倒置不行，要用那種側面發(fā)射光的倒置顯微鏡看，用吖啶橙或者鈣綠素之類的染一下就行。

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6樓2011-12-17 00:38:18

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7樓2011-12-17 21:35:00

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常規(guī)i酒精梯度脫水后真空干燥即可用于SEM樣本制備.不是很復雜.

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JingWang

8樓2011-12-18 17:11:50

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今天酒精梯度脫水后，用叔丁醇置換，然后凍干機凍干，還挺快的，明天看掃描，看看啥效果~~

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9樓2011-12-18 21:05:22

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沒用SEM看過細胞，但是用SEM看過膠原纖維組織。一開始時沒有凍干，沒有噴金，直接抽低真空。放大到5000倍后，纖維根本看不清楚；后來凍干后再去看，還是沒有明顯的纖維形態(tài)。。。在這個過程中我也觀察到表面的細胞了，但是因為我不是生物專業(yè)的，沒沒有專門看細胞，不知道有木有損壞。。。希望這些經驗可以幫助到你~

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10樓2012-04-01 09:23:41

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