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[交流] HPLC 含量測(cè)定

HPLC 含量測(cè)定
在254nm的時(shí)候，測(cè)得目標(biāo)產(chǎn)物的含量很高有90%多吧；但是換個(gè)波長(zhǎng)如220nm左右，又出現(xiàn)了一個(gè)雜峰，含量就變成只有50多了。按面積百分比算的，我要定量，是不是要選出峰最多的波長(zhǎng)？不過(guò)這樣測(cè)得基線不穩(wěn)。怎么辦？

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1樓 2011-12-26 16:52:33

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癡夷子皮

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wqj947891(金幣+1):謝謝參與

做紫外，選擇最大吸收波長(zhǎng)。
做含量，不是做有關(guān)物質(zhì)，雜質(zhì)峰可以先不管。

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2樓2011-12-26 17:11:06

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huazhzh

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怎么最近看到這么多人喜歡用HPLC定量呢，用紫外很不準(zhǔn)的啊，要選擇合適的波長(zhǎng)，甚至標(biāo)樣什么的，多麻煩。如果雜質(zhì)數(shù)量不是特別的多定量要求又不苛刻的話，做個(gè)氫譜看積分也比紫外準(zhǔn)多了啊

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3樓2011-12-26 17:58:53

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lantao8823

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HPLC 面積百分比定量是不精準(zhǔn)的，不如外標(biāo)法和內(nèi)標(biāo)法

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4樓2011-12-26 20:23:45

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lemonin2008

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波長(zhǎng)不一樣，紫外吸收不一樣
面積歸一化法定量不準(zhǔn)確

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5樓2011-12-27 07:53:29

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wqj947891

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樓: Originally posted by huazhzh at 2011-12-26 17:58:53:
怎么最近看到這么多人喜歡用HPLC定量呢，用紫外很不準(zhǔn)的啊，要選擇合適的波長(zhǎng)，甚至標(biāo)樣什么的，多麻煩。如果雜質(zhì)數(shù)量不是特別的多定量要求又不苛刻的話，做個(gè)氫譜看積分也比紫外準(zhǔn)多了啊

我們產(chǎn)品比較多 254是通用波長(zhǎng) 我們產(chǎn)品要測(cè)HPLC,LCMS,NMR,不過(guò)hplc，lcms都是通用方法，所以覺(jué)得不怎么準(zhǔn)確。

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6樓2011-12-27 08:00:37

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season987

禁蟲(chóng) (初入文壇)

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408851978(金幣+1): 常來(lái)看看啊 2011-12-27 12:27:37

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7樓2011-12-27 09:53:21

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wqj947891

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樓: Originally posted by lantao8823 at 2011-12-26 20:23:45:
HPLC 面積百分比定量是不精準(zhǔn)的，不如外標(biāo)法和內(nèi)標(biāo)法

內(nèi)標(biāo)外標(biāo) 有通用的標(biāo)準(zhǔn)物樣品很多一個(gè)個(gè)的換很麻煩

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8樓2011-12-27 11:55:51

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yurong818

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9樓2011-12-27 14:06:44

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方書(shū)磊

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西湖醉魚(yú)(金幣+1): 感謝分享。 2011-12-28 13:20:17

定量時(shí)你說(shuō)的百分比是歸一化法，只能做個(gè)大致參考。要想定量你應(yīng)該用外標(biāo)法或者內(nèi)標(biāo)法。因?yàn)閮?nèi)標(biāo)法比較麻煩，所以通常用外標(biāo)法。
定量時(shí)不是要選出峰最多的波長(zhǎng)，如果相關(guān)文獻(xiàn)或藥典沒(méi)有規(guī)定檢測(cè)波長(zhǎng)，一般情況是選一個(gè)你要測(cè)物質(zhì)特征峰最強(qiáng)的波長(zhǎng)。這樣你拿標(biāo)樣的特征峰面積跟你自己的樣品進(jìn)行比較就可以得到含量了。

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10樓2011-12-27 14:29:00

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orionwei

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3樓: Originally posted by huazhzh at 2011-12-26 17:58:53:
怎么最近看到這么多人喜歡用HPLC定量呢，用紫外很不準(zhǔn)的啊，要選擇合適的波長(zhǎng)，甚至標(biāo)樣什么的，多麻煩。如果雜質(zhì)數(shù)量不是特別的多定量要求又不苛刻的話，做個(gè)氫譜看積分也比紫外準(zhǔn)多了啊

核磁定量同樣要選擇合適的內(nèi)標(biāo)，而且不管是HPLC還是NMR都存在系統(tǒng)誤差的問(wèn)題，而且從實(shí)際應(yīng)用來(lái)看，HPLC定量的適用性比NMR要廣得多。
個(gè)人淺見(jiàn)，多多交流。

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11樓2011-12-27 14:36:21

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abczhan

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做紫外要選擇作大吸收波長(zhǎng)

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12樓2012-01-09 21:26:20

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guevara1967

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引用回帖:

不只是“最近”，呵呵，是‘一直’都是用HPLC、GC等色譜手段定量

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13樓2012-01-09 23:09:30

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wqs43

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看客戶的要求來(lái)選擇分析的紫外波長(zhǎng)。HPLC的面積歸一化法的含量只是參考值，不是樣品的真實(shí)含量，要準(zhǔn)確定量，還必須有標(biāo)樣，采用外標(biāo)法或內(nèi)標(biāo)法測(cè)定。

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14樓2012-01-10 06:35:52

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zhrmghgmn

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面積歸一法要求樣品中各組分必須全部出峰，你用面積歸一法測(cè)定的結(jié)果應(yīng)該是不準(zhǔn)確的。可以采用外標(biāo)法或內(nèi)標(biāo)法，在HPLC中，一般用外標(biāo)法的比較多，選擇波長(zhǎng)的原則是靈敏度高，干擾小。

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15樓2012-01-10 07:58:33

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