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qiaolinkun銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
質(zhì)粒功能元件一般有哪些？
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提個(gè)問(wèn)題：質(zhì)粒攜帶的功能元件有哪些？ 不知道這題干中的質(zhì)粒是指哪種質(zhì)粒。 眾大牛們可否以天然質(zhì)粒和人工質(zhì)粒分述之~~ |
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銀蟲 (小有名氣)
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送鮮花一朵 5樓2012-01-03 10:16:48
susizheng
木蟲 (著名寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
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qiaolinkun(金幣+10): ★有幫助 看了還是有點(diǎn)迷糊 不過(guò)還是謝謝了 2012-01-02 13:37:28
amisking(MicEPI+1): 鼓勵(lì)積極應(yīng)助！ 2012-01-02 17:39:11
qiaolinkun(金幣+10): ★有幫助 看了還是有點(diǎn)迷糊 不過(guò)還是謝謝了 2012-01-02 13:37:28
amisking(MicEPI+1): 鼓勵(lì)積極應(yīng)助！ 2012-01-02 17:39:11
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如何閱讀質(zhì)粒圖譜 第一步：首先看Ori的位置，了解質(zhì)粒的類型（原核/真核/穿梭質(zhì)粒） 第二步：再看篩選標(biāo)記，如抗性，決定使用什么篩選標(biāo)記。 （1）Ampr 水解β－內(nèi)酰胺環(huán)，解除氨芐的毒性。 （2）tetr 可以阻止四環(huán)素進(jìn)入細(xì)胞。 （3）camr 生成氯霉素羥乙酰基衍生物，使之失去毒性。 （4）neor（kanr） 氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶 使G418（長(zhǎng)那霉素衍生物）失活 （5）hygr 使潮霉素β失活。 第三步：看多克隆位點(diǎn)（MCS）。它具有多個(gè)限制酶的單一切點(diǎn)。便于 外源基因的插入。如果在這些位點(diǎn)外有外源基因的插入，會(huì)導(dǎo)致某種標(biāo) 志基因的失活，而便于篩選。決定能不能放目的基因以及如何放置目的 基因。 第四步：再看外源DNA插入片段大小。質(zhì)粒一般只能容納小于10Kb的外 源DNA片段。一般來(lái)說(shuō)，外源DNA片段越長(zhǎng)，越難插入，越不穩(wěn)定，轉(zhuǎn) 化效率越低。 第五步：是否含有表達(dá)系統(tǒng)元件，即啟動(dòng)子－核糖體結(jié)合位點(diǎn)－克隆位 點(diǎn)－轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)。這是用來(lái)區(qū)別克隆載體與表達(dá)載體�？寺≥d體中加入 一些與表達(dá)調(diào)控有關(guān)的元件即成為表達(dá)載體。選用那種載體，還是要 以實(shí)驗(yàn)?zāi)康臑闇?zhǔn)繩。 啟動(dòng)子－核糖體結(jié)合位點(diǎn)－克隆位點(diǎn)－轉(zhuǎn)錄終止信號(hào) a 啟動(dòng)子－促進(jìn)DNA轉(zhuǎn)錄的DNA順序，這個(gè)DNA區(qū)域常在基因或操縱子 編碼順序的上游，是DNA分子上可以與RNApol特異性結(jié)合并使之開(kāi)始轉(zhuǎn) 錄的部位，但啟動(dòng)子本身不被轉(zhuǎn)錄。 b增強(qiáng)子/沉默子－為真核基因組（包括真核病毒基因組）中的一種具有 增強(qiáng)鄰近基因轉(zhuǎn)錄過(guò)程的調(diào)控順序。其作用與增強(qiáng)子所在的位置或方向 無(wú)關(guān)。即在所調(diào)控基因上游或下游均可發(fā)揮作用。/沉默子－負(fù)增強(qiáng)子， 負(fù)調(diào)控序列。 c核糖體結(jié)合位點(diǎn)/起始密碼/SD序列（Rbs/AGU/SDs）：mRNA有核糖體 d 轉(zhuǎn)錄終止順序（終止子）/翻譯終止密碼子：結(jié)構(gòu)基因的最后一個(gè)外顯 子中有一個(gè)AATAAA的保守序列，此位點(diǎn)down－stream有一段GT或T富豐 區(qū)，這2部分共同構(gòu)成poly（A）加尾信號(hào)。結(jié)構(gòu)基因的最后一個(gè)外顯子中 有一個(gè)AATAAA的保守序列，此位點(diǎn)down－stream有一段GT或T富豐區(qū)， 這2部分共同構(gòu)成poly（A）加尾信號(hào)。 回答有人之前提出的一個(gè)問(wèn)題：為什么質(zhì)粒圖譜上有的箭頭順時(shí)針有的 箭頭逆時(shí)針，那其實(shí)是代表兩條DNA鏈，即質(zhì)粒是環(huán)狀雙鏈DNA，它的 啟動(dòng)子等在其中一條鏈上，而它的抗性基因在另一條鏈上. |
2樓2012-01-02 12:55:18
susizheng
木蟲 (著名寫手)
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3樓2012-01-02 12:57:32
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zhang8826857(金幣+1): 鼓勵(lì)交流 2012-01-03 11:29:49
zhang8826857(金幣+1): 鼓勵(lì)交流 2012-01-03 11:29:49
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一樓是個(gè)行家，寫的很全了。 載體有克隆載體，表達(dá)載體，穿梭載體 連接小片段的載體（質(zhì)粒載體，小于十kb）、連大片段的載體（噬菌體載體，大約十幾到四十幾kb）、和更大片段的載體（人工染色體幾百kb），前面一個(gè)主要做基因克隆，分析，亞克隆；后面兩個(gè)主要構(gòu)件基因文庫(kù) |
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