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流式細胞術(shù)詳解 22章節(jié)
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一. 流式細胞術(shù)概述 流式細胞術(shù)(Flow Cytometry, FCM)是七十年代發(fā)展起來的高科學技術(shù),它集計算機技術(shù)、激光技術(shù)、流體力學、細胞化學、細胞免疫學于一體, 同時具有分析和分選細胞功能。它不僅可測量細胞大小、內(nèi)部顆粒的性狀,還可檢測細胞表面和細胞漿抗原、細胞內(nèi)DNA、RNA含量等,可對群體細胞在單細胞水平上進行分析, 在短時間內(nèi)檢測分析大量細胞,并收集、儲存和處理數(shù)據(jù),進行多參數(shù)定量分析; 能夠分類收集(分選)某一亞群細胞,分選純度>95%。在血液學、免疫學、腫瘤學、藥物學、分子生物學等學科廣泛應(yīng)用。 國內(nèi)使用的流式細胞儀主要由美國的兩個廠家生產(chǎn):BECKMAN- COULTER公司和Becton-Dickinson公司(簡稱B-D公司)。流式細胞儀主要有兩型:臨床型(又稱小型機、臺式機)和綜合型(又稱大型機、分析型)。BECKMAN-COULTER公司最新產(chǎn)品為EPICS ALTRA和EPICS XL/XL-MCL, B-D公司最新產(chǎn)品為FACS Vantage和FACS Calibur。EPICS XL/XL-MCL和FACS Calibur是臨床型;EPICS ALTRA和 FACS Vantage是綜合型,除具備檢測分析功能外,還具有細胞分選功能,多用于科學研究。 |
細胞生物學實驗經(jīng)驗 | 生物材料類型 | 生物醫(yī)藥操作規(guī)程 | 免疫學實驗經(jīng)驗 |
水產(chǎn)養(yǎng)殖 | 流式細胞 | 實驗技術(shù) | 細胞培養(yǎng)技術(shù) |
流式細胞術(shù) |
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四. 流式細胞儀主要構(gòu)造和工作原理 激光光源及光束形成系統(tǒng) 流式細胞儀可配備一根或多根激光管,常用的激光管是氬離子氣體激光管,它的發(fā)射光波長488ηm,此外可配備氦氖離子氣體激光管(波長633ηm)和/或紫外激光管。 流式細胞儀的主要測定信號熒光是由激發(fā)光激發(fā)的,熒光信號的強弱與激發(fā)光的強度和照射時間相關(guān),激光是一種相干光源,它能提供單波長、高強度、高穩(wěn)定性的光照,正是能達到這一要求的理想的激發(fā)光光源。 在激光光源和流動室之間有兩個圓柱形透鏡,將激光光源發(fā)出的橫截面為圓形的激光光束聚焦成橫截面較小的橢圓形激光光束(22μm×66μm),在這種橢圓形激光光斑內(nèi)激光能量成正態(tài)分布,使通過激光檢測區(qū)的細胞受照強度一致。 |
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二十二. 流式細胞術(shù)在血液學中的應(yīng)用 其他 流式細胞儀可能在兩方面對骨髓增生異常綜合癥(MDS)有用,一是測定CD34陽性細胞數(shù),以監(jiān)測病情,二是測定核蛋白增殖因子(PCNA),有報告PCNA再在生障礙性貧血、骨髓增生異常綜合癥、白血病三種疾病中表達有明顯差異,可輔助鑒別診斷。 此外流式細胞儀也可檢耐藥蛋白,如肺耐藥相關(guān)蛋白(LRP)、多藥耐藥蛋白(MRP)、 P170等。 流式細胞儀也可檢測細胞因子,細胞內(nèi)細胞因子如白介素系列(IL-1—IL-14),腫瘤壞死因子(TNF),干擾素(IFN)等,只要用適當?shù)拇蚩讋┘纯捎每股鲜黾毎蜃訂慰寺】贵w標記后用流式細胞儀測定。 參考文獻 |
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