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蘋(píng)果曬太陽(yáng)新蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
southern blot 的酶切問(wèn)題
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最近在做southern blot ，用CTAB法大量提取水稻DNA，之后用了好幾種常見(jiàn)的酶想將其基因組DNA進(jìn)行酶切，都沒(méi)法切完全。降低了酶切DNA的量（之前用50μl 體系，DNA量是根據(jù)酶的說(shuō)明書(shū)上的濃度換算的，大概5μl左右，5μl酶�，F(xiàn)在將DNA量減至1μl），過(guò)夜酶切，第二天補(bǔ)酶再切3小時(shí)，仍是無(wú)法完全酶切。請(qǐng)各位大俠幫忙分析分析。在下感激不盡！ [ Last edited by 蘋(píng)果曬太陽(yáng) on 2012-1-3 at 15:02 ] |
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【答案】應(yīng)助回帖
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對(duì)于基因組DNA酶切，難度稍微大些。一般切不徹底的原因是提取的DNA純度不夠。我的經(jīng)驗(yàn)是反復(fù)苯酚、氯仿抽提多次。 在酶切的時(shí)候要注意：看說(shuō)明書(shū)上酶的最適宜的濃度和溫度還有適宜的緩沖液濃度。樓主不是用的一種酶吧。原則是溫度不同要先進(jìn)行溫度低的進(jìn)行。濃度不同要先進(jìn)行低濃度的。對(duì)于非常難切的，建議10小時(shí)補(bǔ)充酶一次。連續(xù)切割2天。 |
2樓2012-01-03 16:03:49
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3樓2012-01-05 10:46:34
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5樓2012-01-05 10:49:55
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