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楊文心

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[求助] 急求助幾個(gè)coupling buffer的配制！��！

1.    0.1M  Tris-Hcl PH 8.0
2.    0.1 M NaHCO3 pH 8.3 containing 0.5 M NaCl
3.    0.1 M acetic acid/sodium acetate, pH 4.0 containing 0.5 M NaCl
4.    0.1 M Tris-HCl, pH 8.0 containing 0.5 M NaCl.

本人實(shí)驗(yàn)中需要用到以上幾個(gè)coupling buffer，以前沒(méi)做過(guò)生物方面的實(shí)驗(yàn)，不知道該如何配制它們，希望各位蟲(chóng)友能夠告知準(zhǔn)確配制它們的方法（具體的用量和操作方法以及注意事項(xiàng)），感激不盡！
另請(qǐng)教：
      1.見(jiàn)過(guò)別的資料上有些講了其中一些buffer的配制方法，但是濃度或者PH不同，請(qǐng)問(wèn)可以按照其方法配制好了后再直接稀釋相應(yīng)的倍數(shù)然后直接用對(duì)應(yīng)的酸堿調(diào)PH嗎？
      2.如果可以，那么第2個(gè)buffer該用什么調(diào)PH呢？能用NaOH溶液?jiǎn)�？該用多大濃度的NaOH調(diào)呢？
      3.文獻(xiàn)中說(shuō)后面3個(gè)buffer溶液中都containing 0.5 M NaCl ，這是怎么配制的呢？應(yīng)該不是分別配制兩個(gè)溶液再混合在一起吧，那么又該如何配制呢？

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1樓 2012-01-04 16:31:51

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楊文心

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楊文心: 回帖置頂 2012-01-06 10:46:45

引用回帖:

樓: Originally posted by sususimple at 2012-01-05 11:22:04:
你可以這樣配：
1.先配1MTris-Cl，pH8.0母液，0.2MNaHCO3/NaCO3,pH8.3母液，1 M acetic acid/sodium acetate, pH 4.0母液，5M NaCl母液。
1MTris-Cl，pH8.0母液：用濃HCl調(diào)pH直到8.0，定容。
0.2MNaHCO3/NaCO3 ...

先謝謝你的回答！然后我再弱弱的問(wèn)下，對(duì)于① ④可以直接配制成0.1M的濃度嗎？請(qǐng)教下我若按如下方法配制① ④是否可行：
① 0.1M Tris-HCl PH 8.0
先稱(chēng)12.11g Tris堿溶于950mL～970mL 無(wú)離子水中，邊攪拌邊滴加濃 HCl，
用pH計(jì)測(cè)定溶液pH值至所需的pH值，然后再加水補(bǔ)足到1L。
④ 0.1 M Tris-HCl, pH 8.0 containing 0.5 M NaCl
先稱(chēng)12.11g Tris堿溶于950mL～970mL 無(wú)離子水中，再加入24.25g NaCl邊攪拌邊滴加濃 HCl，用pH計(jì)測(cè)定溶液pH值至所需的pH值，然后再加水補(bǔ)足到1L。

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4樓2012-01-06 10:28:09

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【答案】應(yīng)助回帖

★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木(金幣+2, 專(zhuān)家考核): 簡(jiǎn)潔又明了 2012-01-05 08:29:35
楊文心(金幣+2): ★有幫助呵呵…謝謝你的回答！ 2012-01-09 11:07:51

1、可以
2、用NaCO3溶液調(diào)pH
3、containing 0.5 M NaCl是配的時(shí)候就加了0.5 M NaCl（定容或者調(diào)pH之前）。

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2樓2012-01-04 23:04:18

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sususimple

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【答案】應(yīng)助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
wanhscn(金幣+5, 專(zhuān)家考核): 感謝專(zhuān)業(yè)的應(yīng)助！whs 2012-01-05 11:35:27

你可以這樣配：
1.先配1MTris-Cl，pH8.0母液，0.2MNaHCO3/NaCO3,pH8.3母液，1 M acetic acid/sodium acetate, pH 4.0母液，5M NaCl母液。
1MTris-Cl，pH8.0母液：用濃HCl調(diào)pH直到8.0，定容。
0.2MNaHCO3/NaCO3,pH8.3母液：先分別配好0.2MNaHCO3和0.2M NaCO3，然后兩個(gè)溶液兌在一起直到pH到8.3.
1 M acetic acid/sodium acetate, pH 4.0母液：先配好1 M acetic acid和1M sodium acetate,然后兩個(gè)溶液兌在一起直到 pH為4.0。
2.你要配的4種buffer就只需要先算好需要用的母液量，最后再定容就可以了。定容的水最好是超純水，這樣就不會(huì)影響pH。
比如配1L的Buffer4:0.1 M Tris-HCl, pH 8.0 containing 0.5 M NaCl：量筒中加入100ml 1MTris-Cl，pH8.0母液,100ml 5M NaCl，加入超純水至體積到1L即可。

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3樓2012-01-05 11:22:04

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★ ★
西瓜(金幣+2): 細(xì)心周到哦~ 2012-01-06 18:56:02
楊文心(金幣+20): ★★★很有幫助呵呵…忘了給你金幣了，再次感謝你哈！ 2012-01-09 11:12:20

引用回帖:

4樓: Originally posted by 楊文心 at 2012-01-06 10:28:09:
先謝謝你的回答！然后我再弱弱的問(wèn)下，對(duì)于① ④可以直接配制成0.1M的濃度嗎？請(qǐng)教下我若按如下方法配制① ④是否可行：
① 0.1M Tris-HCl PH 8.0
先稱(chēng)12.11g Tris堿溶于950mL～970mL 無(wú)離子水中，邊攪拌邊 ...

可以。
你如果只是偶爾用這些Buffer，那直接配成你需要的濃度就可以了，這樣也可以省試劑。我之前建議你先配好母液再稀釋?zhuān)强紤]到如果這些Coupling Buffer用的頻繁的話(huà)，以后配起來(lái)方便。

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5樓2012-01-06 14:36:44

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引用回帖:

5樓: Originally posted by sususimple at 2012-01-06 14:36:44
可以。
你如果只是偶爾用這些Buffer，那直接配成你需要的濃度就可以了，這樣也可以省試劑。我之前建議你先配好母液再稀釋?zhuān)强紤]到如果這些Coupling Buffer用的頻繁的話(huà)，以后配起來(lái)方便。...

想問(wèn)一下50mM Tris-acetate buffer, pH8.5緩沖液是不是可以這樣配制：
6.05gTris堿溶于去離子水中，加入乙酸調(diào)pH值到8.5，加水補(bǔ)足至1000ml即可？謝謝！

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6樓2012-10-26 11:13:15

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想請(qǐng)教一下，如果我要配制50mM Tris-acetate buffer, pH8.5緩沖液，是不是可以這樣：先稱(chēng)6.05gTris堿溶于900ml去離子水中，再滴加乙酸調(diào)pH值到8.5.用水補(bǔ)足至1000ml即可？

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7樓2012-10-26 11:16:53

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