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intron5811銅蟲 (小有名氣)
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[交流]
要做抗體，如何選擇用哪段序列來表達(dá)蛋白？ 已有4人參與
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要做抗體，如何選擇用哪段序列來表達(dá)蛋白？如何保證抗體的特異性？ 我是新人，沒做過表達(dá)蛋白來做抗體。 我有這個基因的序列，但是編碼的蛋白很長，有大概一千個AA。 其中很重要的 domain 包括 C 端有一個，N 端有一個，N 端的很長，保守性也挺好，有若干個 HOMOLOG。如果選擇N 端的話，會不會保守性不太好呢？或者我應(yīng)該怎么選擇呢？該用多長的片段呢？或者有沒有直接的文獻(xiàn)可以閱讀參考呢？謝謝。 |
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gongeleven4樓2012-01-31 11:12:30
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表達(dá)抗體，最重要的是要表達(dá)出與抗原結(jié)合的區(qū)段。因為這部分是直接與你的抗原相結(jié)合的，只有正確表達(dá)了抗體的抗原結(jié)合區(qū)才能發(fā)揮免疫作用。 一般抗體與抗原結(jié)合的部分為抗體的N段的CDR區(qū)。要弄清楚你的抗體抗原結(jié)合區(qū)，你可以做一個抗原結(jié)合表位作圖，通過實驗測定你的抗體的抗原結(jié)合區(qū)。也可以查閱文獻(xiàn)，看看你的抗體是結(jié)合抗原的哪個抗原決定族的。 |
2樓2012-01-31 10:29:54
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3樓2012-01-31 11:05:54
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3 樓理解比較對。 “看看針對這個抗原蛋白的表位分析方面的資料，如果從來沒有人做過，我就建議你自己做個表位分析吧。可以利用一些展示技術(shù)去做。 ： 這個不知道怎么做？表位分析？只知道這個基因有個家族， 家族間保守型還挺強的。在別的物種中，這個基因倒是有現(xiàn)成的商業(yè)抗體，但老板覺得還是自己的物種里自己表達(dá)蛋白做抗體比較好。所以就要我做了。有沒有什么文獻(xiàn)可以推薦來看看？到底該如何去分析這個序列然后拿出合適的片段去做克隆表達(dá)？ |
5樓2012-01-31 14:07:56
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