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ywxkjjh金蟲 (初入文壇)
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[求助]
PITC衍生化測定氨基酸
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用PITC衍生化測定甘氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺的含量 測定步驟： 1. 用純水配制甘氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺的混合液，其濃度都大約為0.05mg/mL，得到甘氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺的混合標準溶液。 2. 配制1.2%PITC乙腈溶液和14%TEA乙腈溶液。 3. 衍生化過程：取200uL氨基酸混合標準溶液于1.5mL離心管中，然后加入100uL1.2%PITC乙腈溶液和100uL14%TEA乙腈溶液，搖震使其混合均勻，然后于水浴鍋中水浴加熱1小時，然后加入500uL正己烷萃取兩次，最后取下層液200uL于HPLC瓶中,然后再加入400uL水稀釋，用HPLC分析。 色譜條件： 柱子：Agilent SB-Aq 250mm*4.6mm, 5um 流動相A：50mM NaAC (pH=6.5) 流動相B：50mM NaAC (pH=6.5):ACN=1:1 Time:0-10-25-40min B%:5%-5%-95%-95% 進樣量10uL 出現(xiàn)問題： 1. 甘氨酸和谷氨酰胺衍生化峰會分叉。 2. 會出現(xiàn)很多雜峰，尤其是在強洗脫部分。 請有經(jīng)驗的蟲友們多多幫助我！謝謝！ |
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2樓2012-01-31 17:49:52
3樓2013-07-10 12:42:12
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