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SDS-PAGE與蛋白質(zhì)內(nèi)部共價健的關系
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| 請教一個問題,我有一個蛋白,含有二硫鍵的,用分析柱分析結(jié)果,聚體占70%,單體占30%,但是跑非還原的SDS-PAGE,結(jié)果聚體占60%,單體占40%。是不是能說明蛋白質(zhì)聚體里面10%是非二硫鍵(比如可能是氫鍵)結(jié)合的,跑電泳的時候被打斷了,轉(zhuǎn)化成單體了???還是說蛋白內(nèi)部還有非共價結(jié)合的???SDS-PAGE能反映蛋白內(nèi)部結(jié)合的情況嗎??? |

金蟲 (小有名氣)
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樓主,我來說幾句吧,希望能給你解解惑! 1. SDS-page只是用來定性檢測蛋白的,并不能用來定量檢測!無論是還原性還是費還原性的,因為你跑SDS-page時,膠是有一定厚度的,你要用立體的三維空間結(jié)構(gòu)去想象,并不是在照片上反映的二維平面考馬斯亮藍染色的深淺度,然后你再通過PS粗估濃度的!(希望你能想象和理解。! )2.非還原性SDS-page并不能完全打開非共價鍵形成的二聚體或多聚體!我曾今做過一個因子,human NT-4,他的非共價鍵式的二聚體才具有活性!當時我仍在非還原性膠上檢測出來了。。∫胪耆蜷_非共價鍵形式的二聚體,或許可以通過含有Urea的SDS-PAGE! 3.要想準確的分析你的蛋白到底單體與聚體分別占多少!其實你的分析柱就能說明問題!要想更嚴謹點,可以送給有關公司打個HPLC! 以上是我個人意見,希望有所幫助! ![]() ![]() ![]() ![]() ![]() |

金蟲 (正式寫手)

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