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SDS-PAGE與蛋白質(zhì)內(nèi)部共價(jià)健的關(guān)系
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| 請(qǐng)教一個(gè)問題，我有一個(gè)蛋白，含有二硫鍵的，用分析柱分析結(jié)果，聚體占70%，單體占30%，但是跑非還原的SDS-PAGE，結(jié)果聚體占60%，單體占40%。是不是能說明蛋白質(zhì)聚體里面10%是非二硫鍵（比如可能是氫鍵）結(jié)合的，跑電泳的時(shí)候被打斷了，轉(zhuǎn)化成單體了？？？還是說蛋白內(nèi)部還有非共價(jià)結(jié)合的？？？SDS-PAGE能反映蛋白內(nèi)部結(jié)合的情況嗎？？？ |
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2樓2012-02-03 16:23:39
花的淚
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3樓2012-02-03 16:55:41
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5樓2013-05-12 16:42:33
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【答案】應(yīng)助回帖
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樓主，我來說幾句吧，希望能給你解解惑！ 1. SDS-page只是用來定性檢測(cè)蛋白的，并不能用來定量檢測(cè)！無論是還原性還是費(fèi)還原性的，因?yàn)槟闩躍DS-page時(shí)，膠是有一定厚度的，你要用立體的三維空間結(jié)構(gòu)去想象，并不是在照片上反映的二維平面考馬斯亮藍(lán)染色的深淺度，然后你再通過PS粗估濃度的�。ㄏＭ隳芟胂蠛屠斫猓。�！  ）2.非還原性SDS-page并不能完全打開非共價(jià)鍵形成的二聚體或多聚體！我曾今做過一個(gè)因子，human NT-4，他的非共價(jià)鍵式的二聚體才具有活性！當(dāng)時(shí)我仍在非還原性膠上檢測(cè)出來了�。�！要想完全打開非共價(jià)鍵形式的二聚體，或許可以通過含有Urea的SDS-PAGE！ 3.要想準(zhǔn)確的分析你的蛋白到底單體與聚體分別占多少！其實(shí)你的分析柱就能說明問題！要想更嚴(yán)謹(jǐn)點(diǎn)，可以送給有關(guān)公司打個(gè)HPLC! 以上是我個(gè)人意見，希望有所幫助��！  |
6樓2013-05-12 19:10:50
yili_90
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【答案】應(yīng)助回帖
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SDS 是sodium dodecyl sulfide.可以使蛋白質(zhì)活，也就是將較大的蛋白質(zhì)分開成若干亞基。他只作用于亞基之間的二硫鍵。第一個(gè)作用是使得亞基表面帶負(fù)電，從而保證了電泳時(shí)，所有亞基都會(huì)向正極移動(dòng)。第二個(gè)作用是使不帶電的亞基或多肽帶電，使得他能夠根據(jù)自身質(zhì)量不同而向正極移動(dòng)不同距離 PAGE是polyacrylamide gel electrophoresis.是根據(jù)蛋白質(zhì)大小不同而分離蛋白質(zhì)的 |
7樓2013-05-14 13:58:43
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