joan198108

BioEPI: 1
應(yīng)助: 107 (高中生)
金幣: 6525.2
帖子: 842
在線: 413.5小時(shí)
蟲號: 859607

[交流] 雙酶切問題

雙酶切質(zhì)粒載體，酶切完全后得到兩個(gè)片段：約5000bp和100bp，通�；厥誔CR不容易檢測到100bp的條帶，這樣就不容易區(qū)分大片段是雙酶切后產(chǎn)物的還是單酶切產(chǎn)物。當(dāng)然，采用高濃度凝膠可以檢測出100bp的條帶，不知道還有沒有其他簡單易行的方法進(jìn)行區(qū)分呢，歡迎指教。

回復(fù)此樓

» 猜你喜歡

277跪求調(diào)劑已經(jīng)有11人回復(fù)
一志愿北京化工大學(xué)材料與化工（085600）296求調(diào)劑已經(jīng)有18人回復(fù)
求調(diào)劑已經(jīng)有6人回復(fù)
0703化學(xué) 已經(jīng)有14人回復(fù)
面上5B能上會嗎？已經(jīng)有7人回復(fù)
0703本科鄭州大學(xué)求調(diào)劑已經(jīng)有7人回復(fù)
286分調(diào)劑已經(jīng)有3人回復(fù)
0703化學(xué)/290求調(diào)劑/本科經(jīng)歷豐富/工科也可已經(jīng)有15人回復(fù)
317分一志愿南理工材料工程本科湖工大求調(diào)劑已經(jīng)有11人回復(fù)
332求調(diào)劑已經(jīng)有12人回復(fù)

» 搶金幣啦！回帖就可以得到:

查看全部散金貼

1樓 2012-02-07 10:54:59

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

香菱兒

鐵桿木蟲 (著名寫手)

BioEPI: 1
應(yīng)助: 14 (小學(xué)生)
金幣: 7591
帖子: 2220
在線: 198小時(shí)
蟲號: 420152

★
joan198108(金幣+1):謝謝參與

跑PAGE膠
膠回收自連

酶切載體是為了克隆吧，直接往下做，再做一個(gè)自連對照看看

贊一下(1人)

回復(fù)此樓

2樓2012-02-07 12:49:58

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

brightfuture01

木蟲之王 (文壇精英)

★ ★ ★
joan198108(金幣+1):謝謝參與
看天(金幣+2): 鼓勵(lì)交流 2012-02-07 13:20:36

常用的一些高效率的限制性內(nèi)切酶如BamHI、EcoRI等酶切幾個(gè)小時(shí)就完全酶切了，你所提到的這個(gè)問題就不存在。如果是低效率的限制性內(nèi)切酶，最好過夜酶切。

最好能切膠回收5000bp的酶切產(chǎn)物，畢竟你的另一段有100bp。

前些年的時(shí)候國產(chǎn)試劑盒的質(zhì)量比較差，雖說能回收100以上的DNA片段，但是基本上回收不到100bp�，F(xiàn)在國產(chǎn)試劑盒的質(zhì)量也比較高了，100bp的片段過PCR柱純化試劑盒殘留太多，連接很容易重新連回到載體上�！�

贊一下(2人)

回復(fù)此樓

3樓2012-02-07 13:01:21

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

joan198108

鐵桿木蟲 (正式寫手)

BioEPI: 1
應(yīng)助: 107 (高中生)
金幣: 6525.2
帖子: 842
在線: 413.5小時(shí)
蟲號: 859607

引用回帖:

樓: Originally posted by 香菱兒 at 2012-02-07 12:49:58:
跑PAGE膠
膠回收自連

酶切載體是為了克隆吧，直接往下做，再做一個(gè)自連對照看看

自連是個(gè)不錯(cuò)的方法，比較直觀，就是操作復(fù)雜了些。謝謝指教！

贊一下

回復(fù)此樓

4樓2012-02-07 13:21:12

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

joan198108

鐵桿木蟲 (正式寫手)

BioEPI: 1
應(yīng)助: 107 (高中生)
金幣: 6525.2
帖子: 842
在線: 413.5小時(shí)
蟲號: 859607

引用回帖:

樓: Originally posted by brightfuture01 at 2012-02-07 13:01:21:
常用的一些高效率的限制性內(nèi)切酶如BamHI、EcoRI等酶切幾個(gè)小時(shí)就完全酶切了，你所提到的這個(gè)問題就不存在。如果是低效率的限制性內(nèi)切酶，最好過夜酶切。

最好能切膠回收5000bp的酶切產(chǎn)物，畢竟你的另一段有100 ...

現(xiàn)在最關(guān)鍵的問題是5000bp附近片段是已經(jīng)完全雙酶切還是只是單酶切的產(chǎn)物，我想請教一下有沒有簡單的驗(yàn)證方法。

贊一下

回復(fù)此樓

5樓2012-02-07 13:44:55

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

brightfuture01

木蟲之王 (文壇精英)

引用回帖:

5樓: Originally posted by joan198108 at 2012-02-07 13:44:55:
現(xiàn)在最關(guān)鍵的問題是5000bp附近片段是已經(jīng)完全雙酶切還是只是單酶切的產(chǎn)物，我想請教一下有沒有簡單的驗(yàn)證方法。

這個(gè)還不簡單么，一個(gè)PCR搞定。

贊一下

回復(fù)此樓

7樓2012-02-07 14:17:21

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

cxl_yll

木蟲 (正式寫手)

應(yīng)助: 22 (小學(xué)生)
金幣: 3380.5
帖子: 982
在線: 316小時(shí)
蟲號: 843397

★
joan198108(金幣+1):謝謝參與

跑一個(gè)單酶切的，跑一個(gè)雙酶切的，在一個(gè)膠上跑，雙酶切的比單酶切的要低一點(diǎn)。我用這個(gè)方法檢測過相差200bp的，沒有問題。是不是能多送我金幣啊~~

贊一下(1人)

回復(fù)此樓

» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）

joan198108

8樓2012-02-09 09:01:14

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

joan198108

鐵桿木蟲 (正式寫手)

BioEPI: 1
應(yīng)助: 107 (高中生)
金幣: 6525.2
帖子: 842
在線: 413.5小時(shí)
蟲號: 859607

引用回帖:

樓: Originally posted by brightfuture01 at 2012-02-07 14:17:21:
這個(gè)還不簡單么，一個(gè)PCR搞定。

PCR還要設(shè)計(jì)合成引物，應(yīng)該是比較麻煩的吧

贊一下

回復(fù)此樓

9樓2012-02-09 09:33:58

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

joan198108

鐵桿木蟲 (正式寫手)

BioEPI: 1
應(yīng)助: 107 (高中生)
金幣: 6525.2
帖子: 842
在線: 413.5小時(shí)
蟲號: 859607

送鮮花一朵

引用回帖:

樓: Originally posted by cxl_yll at 2012-02-09 09:01:14:
跑一個(gè)單酶切的，跑一個(gè)雙酶切的，在一個(gè)膠上跑，雙酶切的比單酶切的要低一點(diǎn)。我用這個(gè)方法檢測過相差200bp的，沒有問題。是不是能多送我金幣啊~~

我的只是相差100bp，并且另一個(gè)片段5000bp+，上面的方法恐怕是不太容易觀察。金幣就不送了，給朵小紅花吧，呵呵

贊一下

回復(fù)此樓

10樓2012-02-09 09:36:23

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

amilie030312

金蟲 (正式寫手)

應(yīng)助: 7 (幼兒園)
金幣: 644.8
帖子: 407
在線: 47.3小時(shí)
蟲號: 296900

★
joan198108(金幣+1):謝謝參與

你這個(gè)問題如果是應(yīng)付上圖的那種我給你個(gè)建議，不知道行不行，我之前嘗試過用兩塊同樣大小的膠但是濃度不同，在同樣位置來跑，照相的時(shí)候兩個(gè)膠疊在一起，5000的那個(gè)放下面，你可以試試，應(yīng)付上圖可以，如果酶用的好就不用擔(dān)心是酶切有問題了，因?yàn)榭隙]問題。

贊一下(1人)

回復(fù)此樓

11樓2012-02-09 10:59:20

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

cxl_yll

木蟲 (正式寫手)

應(yīng)助: 22 (小學(xué)生)
金幣: 3380.5
帖子: 982
在線: 316小時(shí)
蟲號: 843397

★
小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖

引用回帖:

10樓: Originally posted by joan198108 at 2012-02-09 09:36:23:
我的只是相差100bp，并且另一個(gè)片段5000bp+，上面的方法恐怕是不太容易觀察。金幣就不送了，給朵小紅花吧，呵呵

我大片段5000bp多，附件1孔mark,2,3孔質(zhì)粒，4-7雙酶切，8-11是對應(yīng)的雙酶切。我的不太明顯，你可以膠濃度大一些，電壓低一些，跑膠時(shí)間長一些。

贊一下(1人)

回復(fù)此樓

» 本帖附件資源列表

歡迎監(jiān)督和反饋：小木蟲僅提供交流平臺，不對該內(nèi)容負(fù)責(zé)。
本內(nèi)容由用戶自主發(fā)布，如果其內(nèi)容涉及到知識產(chǎn)權(quán)問題，其責(zé)任在于用戶本人，如對版權(quán)有異議，請聯(lián)系郵箱：xiaomuchong@tal.com
附件 1 : 20110330梅切3u.BMP

2012-02-09 15:34:28, 433.05 K

12樓2012-02-09 15:39:21

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

cxl_yll

木蟲 (正式寫手)

應(yīng)助: 22 (小學(xué)生)
金幣: 3380.5
帖子: 982
在線: 316小時(shí)
蟲號: 843397

我相差也是100bp

贊一下

回復(fù)此樓

13樓2012-02-09 15:40:36

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

joan198108

鐵桿木蟲 (正式寫手)

BioEPI: 1
應(yīng)助: 107 (高中生)
金幣: 6525.2
帖子: 842
在線: 413.5小時(shí)
蟲號: 859607

引用回帖:

12樓: Originally posted by cxl_yll at 2012-02-09 15:39:21:
我大片段5000bp多，附件1孔mark,2,3孔質(zhì)粒，4-7雙酶切，8-11是對應(yīng)的雙酶切。我的不太明顯，你可以膠濃度大一些，電壓低一些，跑膠時(shí)間長一些。

請問你的凝膠濃度多大，濃度太高溶解是個(gè)問題，你是如何溶膠的呢？

贊一下

回復(fù)此樓

14樓2012-02-09 15:56:03

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

cxl_yll

木蟲 (正式寫手)

應(yīng)助: 22 (小學(xué)生)
金幣: 3380.5
帖子: 982
在線: 316小時(shí)
蟲號: 843397

★
小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖

引用回帖:

14樓: Originally posted by joan198108 at 2012-02-09 15:56:03:
請問你的凝膠濃度多大，濃度太高溶解是個(gè)問題，你是如何溶膠的呢？

膠是3%的，你TAE可以稍微多加一點(diǎn)，它一加熱揮發(fā)厲害，加熱一會，瑤一會，電壓可以設(shè)成90-100伏

贊一下(1人)

回復(fù)此樓

15樓2012-02-09 22:49:48

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

joan198108

鐵桿木蟲 (正式寫手)

BioEPI: 1
應(yīng)助: 107 (高中生)
金幣: 6525.2
帖子: 842
在線: 413.5小時(shí)
蟲號: 859607

引用回帖:

樓: Originally posted by cxl_yll at 2012-02-09 22:49:48:
膠是3%的，你TAE可以稍微多加一點(diǎn)，它一加熱揮發(fā)厲害，加熱一會，瑤一會，電壓可以設(shè)成90-100伏

多謝！

回復(fù)此樓

16樓2012-02-10 08:46:41

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

簡單回復(fù)

clarktao6樓

2012-02-07 13:52 回復(fù)

joan198108(金幣+1):謝謝參與

最具人氣熱帖推薦 [查看全部]	作者	回/看	最后發(fā)表

[有機(jī)交流] 考研調(diào)劑 +5	watb 2026-03-26	5/250	2026-03-30 11:51 by yjolah
[考研] 085404求調(diào)劑，總分309，本科經(jīng)歷較為豐富 +6	來財(cái)aa 2026-03-25	6/300	2026-03-30 09:48 by 青海小西牛
[考研] 281求調(diào)劑 +4	亞克西good 2026-03-26	6/300	2026-03-29 21:06 by 啊李999
[考博] 26申博自薦 +6	whh869393 2026-03-24	6/300	2026-03-29 21:05 by nxgogo
[考研] 總分293求調(diào)劑 +8	加一一九 2026-03-25	11/550	2026-03-29 19:53 by 無際的草原
[考研] 322求調(diào)劑：一志愿湖南大學(xué) 材料與化工（085600），已過六級。 +4	XX小鄧 2026-03-29	4/200	2026-03-29 17:34 by 無際的草原
[考研] 材料與化工（0856）304求B區(qū)調(diào)劑 +8	邱gl 2026-03-27	8/400	2026-03-28 12:42 by 唐沐兒
[考研] 291求調(diào)劑 +15	hhhhxn.. 2026-03-23	21/1050	2026-03-28 11:26 by self2008
[考研] 藥學(xué)105500求調(diào)劑 +3	Ssun。。 2026-03-28	3/150	2026-03-28 11:24 by lxf170613
[考研] 材料求調(diào)劑一志愿哈工大324 +7	閆旭東 2026-03-28	9/450	2026-03-28 08:51 by Xu de nuo
[考研] 340求調(diào)劑 +5	jhx777 2026-03-27	5/250	2026-03-28 04:18 by fmesaito
[考研] 279 分求調(diào)劑 +4	睡個(gè)好覺_16 2026-03-24	4/200	2026-03-27 15:05 by 醉在風(fēng)里
[考研] 341求調(diào)劑 +7	青檸檬1 2026-03-26	7/350	2026-03-27 00:19 by wxiongid
[考研] 材料考研求調(diào)劑 +3	Dendel 2026-03-23	6/300	2026-03-26 17:51 by fmesaito
[考研] 機(jī)械學(xué)碩310分，數(shù)一英一，一志愿211本科雙非找調(diào)劑信息 +3	@357 2026-03-25	3/150	2026-03-26 16:34 by by.MENG
[考研] 281求調(diào)劑 +6	Koxui 2026-03-24	7/350	2026-03-26 15:37 by 無際的草原
[考研] 一志愿南京郵電大學(xué) 288分材料考研求調(diào)劑 +3	jl0720 2026-03-26	3/150	2026-03-26 13:39 by zzll406
[考研] 打過很多競賽，085406控制工程300分，求調(diào)劑 +3	askeladz 2026-03-26	3/150	2026-03-26 09:08 by 給你你注意休息
[有機(jī)交流] 有機(jī)合成求助 20+3	FENGSHUJEI 2026-03-23	5/250	2026-03-24 19:31 by 88817753
[考研] 269求調(diào)劑 +4	我想讀研11 2026-03-23	4/200	2026-03-23 21:25 by pswait