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ayao-zy新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
真菌培養(yǎng)總長(zhǎng)雜菌怎么辦
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我做的是課題是植物提取物抑制真菌生長(zhǎng)的，但是用PDA培養(yǎng)真菌時(shí)總長(zhǎng)雜菌，黑色和綠色的小菌落，可能是細(xì)菌污染，分析了各種可能還是解決不了，并且對(duì)照不加藥劑的平板一般不長(zhǎng)雜菌，加了藥劑的瘋狂的長(zhǎng)雜菌，這到底是什么情況，求高手指點(diǎn)。 |
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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樓主，這個(gè)問(wèn)題其實(shí)很簡(jiǎn)單的，我就是做真菌培養(yǎng)發(fā)酵的，你說(shuō)的問(wèn)題不太清楚，我分條回答：1、如果實(shí)驗(yàn)組還沒(méi)加植物提取物，就已經(jīng)長(zhǎng)雜菌了，對(duì)照組沒(méi)長(zhǎng)雜菌，可以得出，你平板滅菌和倒平板沒(méi)問(wèn)題，問(wèn)題可能出現(xiàn)在藥劑中含有雜菌，不過(guò)你說(shuō)長(zhǎng)的是黑色和綠色的雜菌，你應(yīng)該觀察一下菌落形態(tài)，如果菌落直徑小，表面為油乎乎的，這才是細(xì)菌污染，不過(guò)我個(gè)人經(jīng)驗(yàn)判斷這種情況應(yīng)該沒(méi)有才對(duì)，黑色和綠色的雜菌應(yīng)該是真菌才對(duì)，因?yàn)槟阕龅氖侵参锾崛∥镆种普婢L(zhǎng)，首先你得先培養(yǎng)出目標(biāo)真菌，而藥劑是防止PDA培養(yǎng)基中長(zhǎng)細(xì)菌的，原理是破壞細(xì)菌細(xì)胞壁中的肽聚糖的合成。所以這種藥劑對(duì)真菌是不起作用的，真菌細(xì)胞壁中沒(méi)有肽聚糖，所以，你污染的雜菌就是真菌。不會(huì)是細(xì)菌污染。 2、對(duì)于藥劑中有真菌污染的情況，你可以選擇無(wú)菌濾膜過(guò)濾，這個(gè)一般是過(guò)濾細(xì)菌的，但真菌的菌體比細(xì)菌大，也能過(guò)濾真菌。還有一種辦法，如果你的藥劑分子耐高溫的話，干脆滅菌鍋滅菌，不過(guò)我估計(jì)這種辦法不太可行。所以建議用第一種辦法。。 3、樓主既然選擇了這個(gè)方向，就應(yīng)該先學(xué)習(xí)一下，真菌和細(xì)菌的在培養(yǎng)方面應(yīng)該注意的問(wèn)題，其中最重要的就是操作規(guī)范問(wèn)題，接種過(guò)程中很有可能污染雜菌的，即便是紫外殺菌了，染菌的可能性也很大。。。。 呵呵，共同學(xué)習(xí)吧。。。。。希望可以幫到你。。。 |
10樓2012-02-27 10:02:52
zdwxxw
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ayao-zy
3樓2012-02-10 16:22:30
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4樓2012-02-11 08:44:32
twisty
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6樓2012-02-11 14:06:22
ayao-zy
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7樓2012-02-13 09:16:45
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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“對(duì)照一般不長(zhǎng)雜菌”，首先判斷你的操作處理還是有一定的問(wèn)題，建議： 1. 無(wú)菌操作要規(guī)范 2. 培養(yǎng)皿蓋上的冷凝水要去除 3. 配母液和稀釋液都在無(wú)菌操作臺(tái)進(jìn)行無(wú)菌操作，稀釋時(shí)可加無(wú)菌水或液體PDA培養(yǎng)基 具體原因要看你的具體操作來(lái)分析，如，你做的是含藥平板還是涂布平板等，希望可以對(duì)你的實(shí)驗(yàn)有幫助，祝你實(shí)驗(yàn)順利！ |
8樓2012-02-13 10:06:49
zdwxxw
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【答案】應(yīng)助回帖
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分別分析吧, 1.假設(shè)藥劑里面有污染微生物，不處理藥劑的話，那么無(wú)論你的操作多么規(guī)范，最后還是要長(zhǎng)雜菌，所以第一步就是要過(guò)濾除菌（其實(shí)我覺(jué)得有90%以上的把握就是藥劑污染的原因）。把你的藥劑溶解（最好用無(wú)菌水）之后，在無(wú)菌條件下過(guò)0.22或0.45μm的濾膜（要用到濾菌器），收集到已滅菌的容器中備用。 2.既然對(duì)照不長(zhǎng)雜菌，我想你的無(wú)菌操作應(yīng)該還可以，也沒(méi)有什么值得注意的。加藥劑時(shí)的操作，把固體培養(yǎng)基溶解，冷卻至70-80℃之間加藥劑混勻，冷卻至60℃左右倒平板（也可以冷卻至60℃再加藥劑混勻后直接倒平板，這個(gè)主要看你實(shí)驗(yàn)的經(jīng)驗(yàn)了，總之不要太冷了再加試劑，防止凝固，盡量不要多次融化固體培養(yǎng)基）。其他的操作和對(duì)照組就一樣了，希望對(duì)你有所幫助。祝你實(shí)驗(yàn)順利！ |
9樓2012-02-13 10:50:23
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