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感受態(tài)細(xì)胞里到底有沒有質(zhì)粒？
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如題，實(shí)驗(yàn)室的感受態(tài)細(xì)胞是自己做的，我想知道這個細(xì)胞里本身有沒有質(zhì)粒。網(wǎng)上看人家說買來的商業(yè)化的感受態(tài)是不含質(zhì)粒的，那自己做的呢。如果說它本身有質(zhì)粒，那我抽出來的就不僅是我想要的質(zhì)粒了，就是個混合物了吧？那該怎么檢測，怎么分離呢？不分的話會影響到后續(xù)轉(zhuǎn)染、表達(dá)實(shí)驗(yàn)嗎？ 還有，我轉(zhuǎn)化的菌，提出來的質(zhì)粒有幾個濃度特低，除了低拷貝外還有別的什么原因嗎？會不會是雜菌？雜菌如碰巧能在含抗生素的培養(yǎng)基上長的話，是不是質(zhì)粒提出來就很低還是應(yīng)該和目的菌一樣的高？ |
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
wanhscn(金幣+2): 鼓勵應(yīng)助～有道理 2012-02-16 14:01:51
wanhscn(金幣+2): 鼓勵應(yīng)助～有道理 2012-02-16 14:01:51
| 感受態(tài)細(xì)胞一般是不含質(zhì)粒的，如果懷疑自己的感受態(tài)污染的話，可以將制備感受態(tài)的菌株、制備好未做轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞在抗性培養(yǎng)基上涂一下，看有沒有污染。最好不要用有污染的感受態(tài)，若轉(zhuǎn)化菌生長良好而提質(zhì)粒情況一直不好的話，考慮污染吧。重新制備感受態(tài)或買商業(yè)化的吧。 |
2樓2012-02-16 13:56:36
3樓2012-02-16 14:35:23
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4樓2012-02-16 15:55:27
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