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huangqihong鐵蟲 (小有名氣)
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[交流]
有關(guān)感受態(tài)細胞DH5a的基因型 已有2人參與
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有個問題請教各位高手。 就是E.coli DH5a的基因型：F-，φ80dlacZΔM15，Δ(lacZYA-argF)U169，deoR，recA1，endA1，hsdR17(rk-，mk+)，phoA，supE44，λ-，thi-1，gyrA96，relA1中，deoR，recA1，hsdR17(rk-，mk+)，phoA，supE44，gyrA96都代表什么意思？recA1是指缺失還是存在recA基因？ 謝謝各位指教。 |
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F-，F(xiàn) 因子缺失 φ80dlacZΔM15，lacZDM15（Lactose）Map position：8 min功能：lacZM15是表達β-半乳糖苷酶α片斷的一段基因，當M15缺失（△M15）時，lacZ基因雖然能表達ω片斷，但不能表達α片斷，β-半乳糖苷酶沒有活性。當帶有l(wèi)acZ（α片斷）基因的lac操縱子通過載體DNA（如pUC19 DNA）轉(zhuǎn)化到lacZ△M15基因型的細胞 (如E.coli JM109）時，在有IPTG (異丙基-β-D-1-硫代半乳糖苷) 存在的情況下, β-半乳糖苷酶表現(xiàn)出活性,它能分解X-gal (半乳糖類似物)，使其呈現(xiàn)藍色。因此可以通過平板上的藍白菌落進行克隆體的鑒定。 Δ(lacZYA-argF)U169， deoR，功能：deoR 是大腸桿菌中deo 操縱子的調(diào)節(jié)基因，它表達的阻遏蛋白對deo 操縱子具有重 要的調(diào)控作用。deo 操縱子位于大腸桿菌基因圖譜100 min 的位置，它含有deoA、deoB、deoC 和deoD 等結(jié)構(gòu)基因，分別表達DNA 代謝所需的酶類，即胸腺嘧啶磷酸化酶、磷酸 轉(zhuǎn)位酶、脫氧核糖磷酸醛縮酶和嘌呤核苷磷酸化酶。deoR 基因的變異，使deo 操縱子的阻遏蛋白不能表達，宿主細胞合成大量的dCTP，可以選擇性地改善大分子DNA 的轉(zhuǎn)化。 recA1，recA (Recombination) 減少克隆DNA的非特異性重組。 功能：recA 基因表達ATP 依賴型DNA 重組酶，它在λ-噬菌體與基因組DNA 的溶原重組時起作用，同時具有對DNA 放射性損傷的修復(fù)功能。由recA 基因的變異所產(chǎn)生的基因型使同源或異源DNA 的重組不能進行，保持插入DNA 的穩(wěn)定性，對DNA 的轉(zhuǎn)化有利。一個菌株的基因型如果是recA，則說明此菌株的表現(xiàn)型是重組缺陷的。 endA1，endA (Endonuclease) 無Endonuclease I 酶活性，有利于質(zhì)粒的純化。功能：endA 基因表達非特異性核酸內(nèi)切酶I，它能使所有DNA 雙鏈解開，在DNA 的復(fù)制和重組中起重要作用。endA 基因的變異將使插入的外源DNA 更加穩(wěn)定，提取的質(zhì)粒純度更高。 hsdR17(rk-，mk+)，限制缺陷，修飾正常 可使 DNA 甲基化，但不限制外源 DNA 。hsdR (Host specificity defective)功能：hsdR 基因表達I 型限制酶EcoK (K12 株) 或EcoB (B 株)，在大腸桿菌細胞中起到一種“抗體”的作用，對外來的各種 DNA 有嚴格的限制。HsdR 基因的變異導(dǎo)致菌株細胞內(nèi)的I 型限制酶EcoK 或EcoB 活性缺失，這對于外來基因的導(dǎo)入及質(zhì)粒轉(zhuǎn)化是有利的。 hsdS20 (rB-、mB-)，其中S20 代表特異性識別蛋白發(fā)生變異，()中的 rB-、mB-表示由于S20 的變異而導(dǎo)致B 株來源的hsdR 和hsdM 的功能缺失。phoA，supE44，supE (Suppressor)功能：supE 基因表達的阻遏蛋白與停止密碼子UAG 結(jié)合，使蛋白質(zhì)合成停止。supE 基因發(fā)生變異時，不能表達正常的阻遏蛋白，即使遇到停止密碼子UAG，蛋白質(zhì)合成仍能繼續(xù)，并使UAG 作為一個密碼子來編碼谷氨酰胺（Glutamine），從而使發(fā)生了琥珀突變（AAG→UAG）的基因?qū)Φ鞍踪|(zhì)表達得以延續(xù)，因此稱supE 為琥珀突變抑制因子。 supE44（sup 基因座E 的44 位突變）。如果不知道幾個等位基因中哪一/幾個發(fā)生了功能性突變，則用連字符“-”代替大寫字母，如trp-31。 λ-，thi-1，功能：thi 基因包含有thiA、thiB、thiC、thiD、thiK、thiL 等。thiA 表達硫氨素噻唑轉(zhuǎn)運蛋白、thiB 表達硫氨素磷酸鹽焦磷酸化酶、thiC 表達硫氨素嘧啶轉(zhuǎn)運蛋白、thiD 表達磷酸甲基化嘧啶激酶、thiK 表達硫氨素激酶、thiL 表達硫氨素甲磷酸激酶。thi 的變異使硫氨素的生物合成不能進行，最小培養(yǎng)基中必須添加硫氨素（VB1），細胞才能正常生長。硫胺素代謝突變 在基本培養(yǎng)基上的生長需硫胺素的存在。 gyrA96，gyrA（Gyrase） 功能：gyrA 基因表達DNA 促旋酶A 亞基。DNA 促旋酶在DNA 復(fù)制時具有使DNA 解旋和回旋的作用。萘啶酮酸 (Nalidixic acid)、4-喹啉（4-Quinoline）等抗生素抑制DNA 促旋酶的活性是通過與促旋酶復(fù)合體 (A2B2)中的A 亞基的結(jié)合實現(xiàn)的。gyrA 基因的變異使DNA促旋酶A 亞基不能正常表達，萘啶酮酸和熒光喹啉等失去結(jié)合目標，從而使該基因型的菌株具有了對萘啶酮酸（Nalr） 和熒光喹啉的抗性。 relA1relA（Relaxed）功能：relA 是松弛調(diào)節(jié)基因，對RNA 的合成具有調(diào)節(jié)抑制作用。同時relA 基因還表達ATP：GTP3'-焦磷酸轉(zhuǎn)移酶，負責(zé)在氨基酸饑餓狀態(tài)下鳥苷3'，5'-二磷酸 (ppGpp) 的合成，以適應(yīng)饑餓環(huán)境。 relA 基因的變異對目的基因的轉(zhuǎn)錄有利。 |
2樓2009-10-09 12:06:17
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7樓2016-11-14 17:11:01
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