 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 6852 | 回復(fù): 15 | |||
| 本帖產(chǎn)生 1 個 BioEPI ，點(diǎn)擊這里進(jìn)行查看 | |||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
joyjane88銅蟲 (初入文壇)
|
[求助]
大腸桿菌超聲破碎參數(shù)，求解！��！
|
||
| 各位蟲友，小弟剛剛學(xué)做純化蛋白。誘導(dǎo)表達(dá)后在超聲破碎，總是無活性不溶性的蛋白，師兄說應(yīng)該是破碎出了問題�？吹酱蠹艺勂扑楣β拾�，探頭啊，參數(shù)啊什么的，無一定論，各有各的高招。迷茫了。想具體問一下破碎1ml（可溶性表達(dá)檢測）和30ml（大規(guī)模誘導(dǎo)純化）重懸菌液分別選用什么型號探頭，什么功率，什么參數(shù)比較合適？目前只有一個6號探頭，一個6號探頭是否都可以應(yīng)付？謝謝 |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 蛋白質(zhì)表達(dá) |
» 猜你喜歡
291求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
材料與化工272求調(diào)劑
已經(jīng)有13人回復(fù)
-
283求調(diào)劑（080500）
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
材料科學(xué)與工程求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
一志愿北京化工大學(xué)材料與化工（085600）296求調(diào)劑
已經(jīng)有17人回復(fù)
-
考研調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
343求調(diào)劑085601
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
08工科求調(diào)劑286
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
337求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
329求調(diào)劑，一志愿西北工業(yè)大學(xué)，材料工程（085601）
已經(jīng)有10人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 大腸桿菌菌落形態(tài)請教
已經(jīng)有29人回復(fù)
- 大腸桿菌培養(yǎng)及破碎
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 大腸桿菌的甲基紅實(shí)驗(yàn)和VP實(shí)驗(yàn)
已經(jīng)有4人回復(fù)
- SOB培養(yǎng)基與LB培養(yǎng)基做大腸桿菌感受態(tài)哪個更好
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 【求助/交流】大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)蛋白酶對目的蛋白的水解問題
已經(jīng)有11人回復(fù)
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
joyjane88(金幣+5): ★★★★★最佳答案 非常感謝，這幾天忙點(diǎn)別的沒有及時回復(fù)。另外，25W是不是太低了，我又試過1.5ml重懸菌液，6號探頭，80W，絕不止10分鐘，鏡檢和離心后都能看到還有沒有破碎的菌體細(xì)胞。 2012-02-21 22:56:01
joyjane88(金幣+5): ★★★★★最佳答案 非常感謝，這幾天忙點(diǎn)別的沒有及時回復(fù)。另外，25W是不是太低了，我又試過1.5ml重懸菌液，6號探頭，80W，絕不止10分鐘，鏡檢和離心后都能看到還有沒有破碎的菌體細(xì)胞。 2012-02-21 22:56:01
|
1. 6號探頭都可以，但是注意1 ml菌液的話要保證探頭插入液面而且不要觸底。 2. 超聲破碎1 ml菌液用25瓦的功率，5s on, 5s off，超聲3-5分鐘差不多就看到菌液澄清了。但是時間和你菌液濃度也有關(guān)系，建議濃度不要過高。 超聲破碎30 ml菌液用25瓦的功率，10s on, 10s off，超聲10-15分鐘差不多就看到菌液澄清了。 3. 超聲前最好加入蛋白酶抑制劑PMSF，以防止目的蛋白的降解。 4. 超聲要在低溫環(huán)境下進(jìn)行，因?yàn)槌晻r會發(fā)熱，不在低溫下容易讓蛋白質(zhì)變性失去活性，出現(xiàn)沉淀。（這個溫度問題你一定要注意）保持低溫環(huán)境的常用經(jīng)濟(jì)方法是：將裝有菌液的管子放在裝有冰的燒杯里，然后一起放超聲儀里超聲。時間久的話及時更換冰。 |
7樓2012-02-17 10:54:15
joyjane88
銅蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 142.7
- 散金: 3
- 帖子: 43
- 在線: 20.4小時
- 蟲號: 1183633
- 注冊: 2011-01-05
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
2樓2012-02-15 09:57:02
xxd429
銀蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 1836.2
- 散金: 30
- 帖子: 38
- 在線: 88.8小時
- 蟲號: 1323109
- 注冊: 2011-06-14
- 性別: MM
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
3樓2012-02-15 16:52:23
alarace
至尊木蟲 (知名作家)
- BioEPI: 1
- 應(yīng)助: 82 (初中生)
- 金幣: 20104.9
- 散金: 15172
- 紅花: 20
- 帖子: 9166
- 在線: 2797.1小時
- 蟲號: 1546961
- 注冊: 2011-12-22
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
silicare(金幣+3, BioEPI+1): 謝謝參與 2012-02-16 12:51:49
silicare(金幣+3, BioEPI+1): 謝謝參與 2012-02-16 12:51:49
| 不同的變幅桿可適用于不同量的重懸液，所以只有一個變幅桿肯定不能解決問題（1ml和30ml），超聲破碎掌握一個基本的原則就是每次超聲保證菌液不過熱就可以。下面是一家超聲破碎儀變幅桿的參數(shù)（僅供參考，非廣告貼）http://www.instrument.com.cn/netshow/SH102081/Q1202165.htm |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
joyjane884樓2012-02-16 10:39:27
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 277跪求調(diào)劑 +6 | 1915668 2026-03-27 | 10/500 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 一志愿雙一流機(jī)械285分求調(diào)劑 +4 | 幸運(yùn)的三木 2026-03-29 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué) +11 | 妮妮ninicgb 2026-03-27 | 11/550 |
|
|
|
[碩博家園] 求調(diào)劑 有機(jī)化學(xué)考研356分 +3 | Nadiums 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
[考研] 322求調(diào)劑 +7 | 宋明欣 2026-03-27 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 317求調(diào)劑 +6 | 十閑wx 2026-03-24 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 286求調(diào)劑 +12 | PolarBear11 2026-03-26 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 085405 考的11408求各位老師帶走 +3 | Qiu學(xué)ing 2026-03-28 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 286求調(diào)劑 +4 | 丟掉懶惰 2026-03-27 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 085404求調(diào)劑，總分309，本科經(jīng)歷較為豐富 +4 | 來財aa 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 316求調(diào)劑 +5 | Pigcasso 2026-03-24 | 5/250 |
|
|
|
[碩博家園] 北京林業(yè)大學(xué)碩導(dǎo)招生廣告 +6 | kongweilin 2026-03-26 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)求調(diào)劑 +3 | 丹青奶蓋 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 281求調(diào)劑 +3 | 亞克西good 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 中國科學(xué)院深圳先進(jìn)技術(shù)研究院-光纖傳感課題組招生-中國科學(xué)院大學(xué)、深圳理工大學(xué)聯(lián)培 +5 | YangTyu1 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 機(jī)械學(xué)碩310分，數(shù)一英一，一志愿211本科雙非找調(diào)劑信息 +3 | @357 2026-03-25 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 285求調(diào)劑 +3 | AZMK 2026-03-24 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑 +4 | 13853210211 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 080500求調(diào)劑 +3 | zzzzfan 2026-03-24 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 接收2026碩士調(diào)劑(學(xué)碩+專碩) +4 | allen-yin 2026-03-23 | 6/300 |
|