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joyjane88銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
大腸桿菌超聲破碎參數(shù)，求解！�。�
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| 各位蟲友，小弟剛剛學(xué)做純化蛋白。誘導(dǎo)表達(dá)后在超聲破碎，總是無活性不溶性的蛋白，師兄說應(yīng)該是破碎出了問題。看到大家談破碎功率啊，探頭啊，參數(shù)啊什么的，無一定論，各有各的高招。迷茫了。想具體問一下破碎1ml（可溶性表達(dá)檢測）和30ml（大規(guī)模誘導(dǎo)純化）重懸菌液分別選用什么型號探頭，什么功率，什么參數(shù)比較合適？目前只有一個6號探頭，一個6號探頭是否都可以應(yīng)付？謝謝 |
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
silicare(金幣+3, BioEPI+1): 謝謝參與 2012-02-16 12:51:49
silicare(金幣+3, BioEPI+1): 謝謝參與 2012-02-16 12:51:49
| 不同的變幅桿可適用于不同量的重懸液，所以只有一個變幅桿肯定不能解決問題（1ml和30ml），超聲破碎掌握一個基本的原則就是每次超聲保證菌液不過熱就可以。下面是一家超聲破碎儀變幅桿的參數(shù)（僅供參考，非廣告貼）http://www.instrument.com.cn/netshow/SH102081/Q1202165.htm |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
joyjane884樓2012-02-16 10:39:27
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
joyjane88(金幣+5): ★★★★★最佳答案 非常感謝，這幾天忙點(diǎn)別的沒有及時回復(fù)。另外，25W是不是太低了，我又試過1.5ml重懸菌液，6號探頭，80W，絕不止10分鐘，鏡檢和離心后都能看到還有沒有破碎的菌體細(xì)胞。 2012-02-21 22:56:01
joyjane88(金幣+5): ★★★★★最佳答案 非常感謝，這幾天忙點(diǎn)別的沒有及時回復(fù)。另外，25W是不是太低了，我又試過1.5ml重懸菌液，6號探頭，80W，絕不止10分鐘，鏡檢和離心后都能看到還有沒有破碎的菌體細(xì)胞。 2012-02-21 22:56:01
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1. 6號探頭都可以，但是注意1 ml菌液的話要保證探頭插入液面而且不要觸底。 2. 超聲破碎1 ml菌液用25瓦的功率，5s on, 5s off，超聲3-5分鐘差不多就看到菌液澄清了。但是時間和你菌液濃度也有關(guān)系，建議濃度不要過高。 超聲破碎30 ml菌液用25瓦的功率，10s on, 10s off，超聲10-15分鐘差不多就看到菌液澄清了。 3. 超聲前最好加入蛋白酶抑制劑PMSF，以防止目的蛋白的降解。 4. 超聲要在低溫環(huán)境下進(jìn)行，因為超聲時會發(fā)熱，不在低溫下容易讓蛋白質(zhì)變性失去活性，出現(xiàn)沉淀。（這個溫度問題你一定要注意）保持低溫環(huán)境的常用經(jīng)濟(jì)方法是：將裝有菌液的管子放在裝有冰的燒杯里，然后一起放超聲儀里超聲。時間久的話及時更換冰。 |
7樓2012-02-17 10:54:15
joyjane88
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6樓2012-02-16 21:41:30
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