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藍(lán)溪溪新蟲 (初入文壇)
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[求助]
提取細(xì)胞毒RNA后，電泳后什么也沒有 已有2人參與
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大家好，小妹我是提取RNA 的新手，這幾天從細(xì)胞毒中提取RNA ，電泳后總是什么也沒有，好像一塊空白膠，下面我把提取的步驟發(fā)上來，求助各位幫忙看一下。 我的細(xì)胞毒一開始是存在-20度，后來我在試驗(yàn)臺上室溫分裝了一次，然后就又保存在-20了。 1、在1.5ml的eppendorf管中加入病毒原液500ul，再加入TRIzol LS500ul，充分混勻，室溫放置10min； 2、加入200ul的氯仿，蓋緊離心管蓋，用力震蕩離心管（溶液充分乳化，成乳白狀，無分相現(xiàn)象），室溫放置10min（由于氯仿沸點(diǎn)低、易揮發(fā)，振蕩時離心管可能爆開，小心）； 3、4℃，12000r/min離心15min，取上層液相移入另一管（切忌吸動白色中間相）； 4、加入等體積異丙醇，輕輕顛倒離心管充分混勻液體，室溫放置10min； 5、4℃，12000r/min離心15min用槍小心吸去所有上清； 6、1ml75%乙醇洗一遍，4℃，8000r/min離心10min用槍小心吸去所有上清，在超凈臺中干燥5min； 7、加入適量DEPC處理水。（ |
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2樓2018-11-23 14:04:49
cry_2013
木蟲 (正式寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
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drwhoknowss: 金幣+1, 鼓勵交流 2018-11-24 10:20:26
drwhoknowss: 金幣+1, 鼓勵交流 2018-11-24 10:20:26
| 我們用Trizol提RNA的時候，加入Trizol就強(qiáng)烈震蕩5min，再靜置5min，后面洗滌的酒精是用DEPC水配置的，其它的步驟大致相同，不知道這兩步對試驗(yàn)有沒有實(shí)質(zhì)的影響。。。因?yàn)槲姨嵬闞NA后很少跑電泳，直接反轉(zhuǎn)錄成cDNA做下面的試驗(yàn)了，感覺病毒RNA提取不會太難，提取過程中腰戴手套，口罩，盡量避免RNA酶的污染，還有一種可能是電泳沒條帶不一定一點(diǎn)RNA都沒有。。。 |
3樓2018-11-23 16:14:25
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