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棕櫚酸對硝基苯酯怎么溶解
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| 我用棕櫚酸對硝基苯酯做脂肪酶的酶活測定實驗，我用水的緩沖液和異丙醇都不太溶，請教一下該怎么辦。 |
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0703化學(xué)求調(diào)劑，各位老師看看我�。�！
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tuobaohua
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【答案】應(yīng)助回帖
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wenjing120(金幣+2): 積極應(yīng)助！ 2012-03-04 10:48:03
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p-NPP（對硝基苯棕櫚酸酯）法： 將30㎎ p-NPP溶解于10ml異丙醇和90ml Tris-HCl緩沖液（PH7.4）中，同時加入TritonX-100 200㎎，組成底物溶液。0.1ml酶液加入2ml底物溶液中，在指定溫度下（可以是35℃，或其他溫度）孵育一段時間（約10min左右，這個看情況），通過酶的作用，釋放出的對硝基苯在分光光度計405nm被檢測。一個單位的脂肪酶活力定義為每分鐘分解p-NPP并釋放出1μmol對硝基苯所需的酶量。 脂肪酶活性測定 1 pNP-乙腈-丙酮標(biāo)準(zhǔn)曲線的構(gòu)建： 原液：將pNP溶解與PBS（PH6.5,0.01M）和乙腈，丙酮溶液中。 稀釋液：及與配置原液時相同體積的PBS，乙腈，丙酮溶液。 10ml測試體系：原液投入量+稀釋液投入量 = 10ml 空白對照：稀釋液10ml 8組測試組：原液不同投入梯度+ 相應(yīng)稀釋液 = 10ml. 測OD405,得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程y = A x + B,和斜率 2 脂肪酶的酶活測定: Lipase 的游離酶的酶活測定: 第一步:稱取 Lipase 干粉(精酶),用10ml PH6.5 0.01m的PBS溶解保存. 第二步:移取上面配制的酶液50ul于搖瓶中,再加入PH 6.5 0.01m的PBS 2.8ml,在搖床中37度,150rpm 條件下震蕩幾分鐘后加入10mM 的對硝基苯酚乙酯150ul,加入后立即計時三分鐘反應(yīng).。 第三步:三分鐘反應(yīng)結(jié)束后立即加入丙酮3ml終止反應(yīng),繼續(xù)震蕩幾分鐘后過濾,取濾液靜態(tài)測OD405 值. 空白配制：PH 6.5 0.01m的PBS 2.85ml+對硝基苯酚乙酯+丙酮 3 比活力計算 將測得的0D405，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，根據(jù)活力測定反應(yīng)體積，脂肪酶蛋白濃度和反應(yīng)時間，得到比活力：X um/min/mg 這里面提到PBS（PH6.5,0.01M）和乙腈，丙酮溶液中 不知道是不是樓主所需要的東西 http://www.gaoyang168.com/html/201108/3512704.html 查到很多脂肪酶酶活性采用如下方法測定的https://www.bosar-gz.com/tx_Info.asp?NewsID=257 |
2樓2012-03-04 10:40:54
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