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北京石油化工學(xué)院2026年研究生招生接收調(diào)劑公告

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銅蟲(chóng) (初入文壇)

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[求助] 棕櫚酸對(duì)硝基苯酯怎么溶解

我用棕櫚酸對(duì)硝基苯酯做脂肪酶的酶活測(cè)定實(shí)驗(yàn)，我用水的緩沖液和異丙醇都不太溶，請(qǐng)教一下該怎么辦。

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1樓 2012-02-22 16:01:37

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tuobaohua

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【答案】應(yīng)助回帖

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wenjing120(金幣+2): 積極應(yīng)助！ 2012-03-04 10:48:03

p-NPP（對(duì)硝基苯棕櫚酸酯）法：
將30㎎ p-NPP溶解于10ml異丙醇和90ml Tris-HCl緩沖液（PH7.4）中，同時(shí)加入TritonX-100 200㎎，組成底物溶液。0.1ml酶液加入2ml底物溶液中，在指定溫度下（可以是35℃，或其他溫度）孵育一段時(shí)間（約10min左右，這個(gè)看情況），通過(guò)酶的作用，釋放出的對(duì)硝基苯在分光光度計(jì)405nm被檢測(cè)。一個(gè)單位的脂肪酶活力定義為每分鐘分解p-NPP并釋放出1μmol對(duì)硝基苯所需的酶量。

脂肪酶活性測(cè)定
1 pNP-乙腈-丙酮標(biāo)準(zhǔn)曲線的構(gòu)建：
原液：將pNP溶解與PBS（PH6.5,0.01M）和乙腈，丙酮溶液中。
稀釋液：及與配置原液時(shí)相同體積的PBS，乙腈，丙酮溶液。
10ml測(cè)試體系：原液投入量+稀釋液投入量 = 10ml
空白對(duì)照：稀釋液10ml
8組測(cè)試組：原液不同投入梯度+ 相應(yīng)稀釋液 = 10ml.
測(cè)OD405,得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程y = A x + B,和斜率
2 脂肪酶的酶活測(cè)定:
Lipase 的游離酶的酶活測(cè)定:
第一步:稱取 Lipase 干粉(精酶),用10ml PH6.5 0.01m的PBS溶解保存.
第二步:移取上面配制的酶液50ul于搖瓶中,再加入PH 6.5 0.01m的PBS 2.8ml,在搖床中37度,150rpm 條件下震蕩幾分鐘后加入10mM 的對(duì)硝基苯酚乙酯150ul,加入后立即計(jì)時(shí)三分鐘反應(yīng).。
第三步:三分鐘反應(yīng)結(jié)束后立即加入丙酮3ml終止反應(yīng),繼續(xù)震蕩幾分鐘后過(guò)濾,取濾液靜態(tài)測(cè)OD405 值.
空白配制：PH 6.5 0.01m的PBS 2.85ml+對(duì)硝基苯酚乙酯+丙酮
3 比活力計(jì)算
將測(cè)得的0D405，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，根據(jù)活力測(cè)定反應(yīng)體積，脂肪酶蛋白濃度和反應(yīng)時(shí)間，得到比活力：X um/min/mg

這里面提到PBS（PH6.5,0.01M）和乙腈，丙酮溶液中
不知道是不是樓主所需要的東西
http://www.gaoyang168.com/html/201108/3512704.html

查到很多脂肪酶酶活性采用如下方法測(cè)定的https://www.bosar-gz.com/tx_Info.asp?NewsID=257

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2樓2012-03-04 10:40:54

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