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影響HPLC分離度的各種因素，并說明如何提高分離度

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1樓 2012-02-22 16:49:54

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rabit5522

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逃跑熊S(金幣+1): 謝謝啦~~ 2012-02-22 17:31:38

溶樣溶劑，流動(dòng)相，方法。。。。蠻多的。。
如何提高？沒有通用方法，只能根據(jù)要分離的物質(zhì)組成，選擇合適的方法和溶劑。選個(gè)方法，試跑一下，然后根據(jù)試跑的結(jié)果，進(jìn)行調(diào)整。

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2樓2012-02-22 17:11:26

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燕子飛鏢

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逃跑熊S(金幣+1): 分離度：R=√n/4×(a-1)/a×k2/(1+k2)不是這個(gè)么？ 2012-02-22 17:34:13
soundhorizo(金幣+1): 感謝專業(yè)指導(dǎo) ^^ 歡迎常來 2012-02-22 18:06:59

分離度的公式是：
R=2(tR2-tR1)/(W1+W2)
你可以通過加大兩個(gè)保留時(shí)間之差再提高。
通過選擇合適的固定相達(dá)到提高分離度的效果，同時(shí)在改變流動(dòng)相組分比例也能提高分離效果。
2. 離子對試劑是其中的一個(gè)手段
3. 不同樣品改變不同參數(shù)如改變PH值、換柱子、降低進(jìn)樣量、降低流速、柱溫等具體問題具體分析
4. 改變洗脫劑的比例等
5. 增加柱溫也是一個(gè)方面。
6. 看了大家的討論，談幾點(diǎn)意見吧。
1）從理論上說可以通過降低塔板高度以及增加相對保留時(shí)間兩個(gè)方面來實(shí)現(xiàn)。
2）在液相色譜實(shí)踐中，色譜柱的分離效能雖然可以通過更換高效色譜柱、調(diào)整最佳流速等手段來控制，但更多情況下還是保留時(shí)間的調(diào)整更為來的方便。
3）改變相對保留時(shí)間（選擇性）的常用手段至少包括：流動(dòng)相配比、pH值、離子對試劑、柱溫度等方面。這些要根據(jù)自己關(guān)注的難分離組分對的具體情況有選擇的實(shí)施，所以，必須首先了解它們之間化學(xué)性質(zhì)的差異，然后有針對地選擇處理手段。
4）液相色譜分析的目標(biāo)成分往往比較復(fù)雜，常涉及多種成分同時(shí)檢測，所以在做分析條件的調(diào)整時(shí)必須同時(shí)兼顧所有主要成分色譜行為的變化，其中既包括目標(biāo)成分，也包括共存的干擾成分。
所以，要想保證所有目標(biāo)成分在任何樣品中都能獲得滿意的分離度，這是一個(gè)十分富有挑戰(zhàn)性的課題，即便一個(gè)經(jīng)驗(yàn)十分豐富的色譜工作者同樣也不敢輕視。
7. 我們常用的C18柱，一般載碳量高的固定相，分離效果要強(qiáng)一點(diǎn)。有時(shí)碰到分離效果不好時(shí)，多采用更換色譜柱（不同品牌）的方法，這樣避免了再去摸索其他條件而耗費(fèi)時(shí)間，能少改動(dòng)盡量少該，方法定下了盡量不去動(dòng)它

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3樓2012-02-22 17:31:43

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燕子飛鏢

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那個(gè)是柱子本身的··

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4樓2012-02-22 17:35:31

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有機(jī)溶劑的比例

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5樓2012-02-23 23:11:54

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癡夷子皮

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逃跑熊S(金幣+1): 謝謝 2012-02-24 17:47:58

色譜柱、柱溫、流動(dòng)相組分（流動(dòng)相的選擇、極性、pH等）、梯度、流速等

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6樓2012-02-24 08:23:49

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jinaipurwd

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逃跑熊S(金幣+2): 謝謝啦~~~~ 2012-02-24 17:47:33

百度查的：色譜的基本原理可以說是因?yàn)榻M分的極性不同,通過不同的固定相的時(shí)候在固定相上吸附能力不相同,那么改變固定相的極性或者流動(dòng)相的極性就是最簡單的辦法(HPLC中固定相和流動(dòng)相是競爭的關(guān)系).

另外可以參考一下這個(gè)網(wǎng)站上有詳細(xì)介紹，不知道是不是樓主MM需要的，《安捷倫醫(yī)藥與生化技術(shù)》第20期，網(wǎng)址如下：
http://www.chem.agilent.com/cag/ ... _20_A3_eclipse.html

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7樓2012-02-24 09:19:33

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8樓2013-12-05 20:24:44

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