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alqfren木蟲 (正式寫手)
研究僧
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[交流]
考馬斯亮藍測定蛋白的結果受蛋白的分子量大小的影響嗎？ 已有7人參與
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研究表明，考馬斯亮藍測蛋白的主要機理是，考馬斯亮藍能夠與蛋白中的堿性氨基酸結合，那么我想問測定結果是否受蛋白的分量的影響？比如說蛋白經(jīng)過一定程度的水解，原始蛋白與不同水解程度的蛋白、完全水解后的氨基酸溶液是否一致？分子量超大的蛋白，是否會因為其復雜的結構，考馬斯亮藍無法與藏在蛋白內(nèi)部的堿性氨基酸結合而結果偏低？如果測定結果受分子量的影響的話，是不是說所測蛋白的分子量必須某個該范圍內(nèi)，比如說在牛血清蛋白分子量（所采用的的標準物質(zhì)，68kDa）上下多少范圍內(nèi)，才能夠采用該方法定量測定？如果不是在這個特定的范圍內(nèi)，是不是所得蛋白的含量只能是相對的，只能在同一種測定方法，同一種測定目標之間進行比較，比如說啤酒，采用BCA或者Lowry與此方法所得結果之間沒有可比性，而同樣采用考馬斯亮藍法測定的啤酒和麥汁中蛋白的結果間也不具有可比性？ 實際上，我只是想測多肽含量，參照大豆肽粉的行業(yè)標準，但是不想用凱氏定氮，想用一種更便捷的測定多肽和游離氨基酸總量的方法，然后再扣除游離氨基酸的含量。如果說考馬斯亮藍法只是無法測定游離氨基酸的量，那么我就可以直接用這種方法測定了，如果說某個分子量一下的多肽都測不出來，比如說2KDa，我就不能用這種方法。 有一篇文獻里測多肽也是用的這種方法，可是想想又有諸多不妥。 想了這么多，考馬斯亮藍這種方法，好像不是一種十分精確的方法，需要探討的東西很多？ 問問各位大中小牛們，你們有沒有過這樣的想法或做過類似的試驗？ |
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2樓2012-02-22 18:48:32
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