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alqfren木蟲 (正式寫手)
研究僧
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[交流]
考馬斯亮藍(lán)測定蛋白的結(jié)果受蛋白的分子量大小的影響嗎？ 已有7人參與
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研究表明，考馬斯亮藍(lán)測蛋白的主要機(jī)理是，考馬斯亮藍(lán)能夠與蛋白中的堿性氨基酸結(jié)合，那么我想問測定結(jié)果是否受蛋白的分量的影響？比如說蛋白經(jīng)過一定程度的水解，原始蛋白與不同水解程度的蛋白、完全水解后的氨基酸溶液是否一致？分子量超大的蛋白，是否會(huì)因?yàn)槠鋸?fù)雜的結(jié)構(gòu)，考馬斯亮藍(lán)無法與藏在蛋白內(nèi)部的堿性氨基酸結(jié)合而結(jié)果偏低？如果測定結(jié)果受分子量的影響的話，是不是說所測蛋白的分子量必須某個(gè)該范圍內(nèi)，比如說在牛血清蛋白分子量（所采用的的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，68kDa）上下多少范圍內(nèi)，才能夠采用該方法定量測定？如果不是在這個(gè)特定的范圍內(nèi)，是不是所得蛋白的含量只能是相對(duì)的，只能在同一種測定方法，同一種測定目標(biāo)之間進(jìn)行比較，比如說啤酒，采用BCA或者Lowry與此方法所得結(jié)果之間沒有可比性，而同樣采用考馬斯亮藍(lán)法測定的啤酒和麥汁中蛋白的結(jié)果間也不具有可比性？ 實(shí)際上，我只是想測多肽含量，參照大豆肽粉的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，但是不想用凱氏定氮，想用一種更便捷的測定多肽和游離氨基酸總量的方法，然后再扣除游離氨基酸的含量。如果說考馬斯亮藍(lán)法只是無法測定游離氨基酸的量，那么我就可以直接用這種方法測定了，如果說某個(gè)分子量一下的多肽都測不出來，比如說2KDa，我就不能用這種方法。 有一篇文獻(xiàn)里測多肽也是用的這種方法，可是想想又有諸多不妥。 想了這么多，考馬斯亮藍(lán)這種方法，好像不是一種十分精確的方法，需要探討的東西很多？ 問問各位大中小牛們，你們有沒有過這樣的想法或做過類似的試驗(yàn)？ |
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2樓2012-02-22 18:48:32
alqfren
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小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
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考馬斯測濃度是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)蛋白的顏色來的吧樓主，既然這樣肯定是與分子量有很大關(guān)系的，我也在糾結(jié)蛋白濃度的問題，但是現(xiàn)在最準(zhǔn)確的方法也是用標(biāo)準(zhǔn)蛋白做基準(zhǔn)測濃度，沒辦法固定到說能測到你的多肽或蛋白的準(zhǔn)確濃度，我?guī)熃阏f這個(gè)方法只是用來做濃度調(diào)整的，無法做準(zhǔn)確定量。我只知道這些。 噢對(duì)了，啤酒蛋白含量各種方法不一樣原因是因?yàn)槠【浦泻性S多雜質(zhì)，BCA法對(duì)蛋白溶液所處環(huán)境要求特別高，有金屬離子、pH不合適都會(huì)有很大影響，所以一般是用來做蛋白提純后的濃度測定滴~ |
8樓2012-03-01 10:03:21
alqfren
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