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[求助]
化合物分離純化的問(wèn)題
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由于本課題組無(wú)人做微生物次生代謝產(chǎn)物方面的實(shí)驗(yàn),所以特向諸位大俠求助: 1、第一個(gè)實(shí)驗(yàn)是關(guān)于分代謝產(chǎn)物的,我現(xiàn)在發(fā)酵了104L,得到乙酸乙酯粗提物 僅13克,其中含有少量的氯化鈉,由于樣品太少,而且自己對(duì)這塊也是新手, 準(zhǔn)備按實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)書(shū)上,進(jìn)行硅膠柱分離,走傳統(tǒng)方法。目標(biāo)是把該菌株產(chǎn)生的 次生代謝產(chǎn)物盡可能多的都分離到,得到結(jié)構(gòu)。 問(wèn)題在于: 1)實(shí)驗(yàn)室目前實(shí)驗(yàn)設(shè)備不足,僅有三根柱子,導(dǎo)師讓我看看缺什么,再買(mǎi)。。。我沒(méi)有經(jīng)驗(yàn),希望各位 支支招? 2)和其他學(xué)校以同學(xué)討論,她說(shuō),樣品少的話,可以先上大孔樹(shù)脂分段,然后液相看出峰條件,再用制備型液相收集樣品,這樣損失較少。不知道是否可行? 2、另一個(gè)實(shí)驗(yàn)是我固態(tài)發(fā)酵做的,粗品得到的也很少,是比較兩中發(fā)酵方法的化合物產(chǎn)生情況不同,我想問(wèn)問(wèn),如果不分單體的話,有沒(méi)有好的辦法能夠說(shuō)明化合物變化啊。 耐心看完,各位辛苦了,謝謝各位了! |

木蟲(chóng) (小有名氣)
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13g應(yīng)該不算少的,呵呵 不知道lz里面大概有多少個(gè)組分?以前做十幾個(gè)發(fā)酵產(chǎn)物組分的時(shí)候有用過(guò)大孔樹(shù)脂分段,梯度洗脫就能分段了,HPLC可以檢測(cè)分段效果,然后在過(guò)硅膠柱粗分,要是組分多而且極性相近的話建議lz你買(mǎi)細(xì)的硅膠,耗時(shí)一點(diǎn)沒(méi)關(guān)系, 如果不需要分離單體的話HPLC不是就可以看出相對(duì)變化么?或者你做個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線神馬的也可以看絕對(duì)的啊,要是有條件做個(gè)LC-MS就更好了呢!我看別人探索發(fā)酵條件一般就用HPLC就夠了呢。。。 |

木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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無(wú)論如何,如果有HPLC的話,先把得到的粗物質(zhì)分析一下。 你發(fā)酵的是真菌吧,其實(shí)粗物質(zhì)的量不算少了。別人有發(fā)酵得到幾g的。你的13g不少了。 我沒(méi)有用過(guò)大孔樹(shù)脂分過(guò)段,不過(guò)薄層層析柱色譜(短而且粗的硅膠柱)倒是很少的方法。 砍完段后,再用HPLC分析,能制備就直接制備,不能制備的在作進(jìn)一步的分離。 樓主,核磁解析結(jié)構(gòu)(平面和立體)是重點(diǎn)。 祝你好運(yùn)。 |



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