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yeshui

鐵蟲(chóng) (小有名氣)

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[求助] 菌落PCR篩選

將片段與載體連接后，轉(zhuǎn)化DH5α，LB板含有抗生素，結(jié)果菌落長(zhǎng)的特別少，而且只是在邊上長(zhǎng)，進(jìn)行菌落PCR篩選，結(jié)果都有目的條帶，但是，經(jīng)過(guò)篩選的菌落劃到另一塊涂有抗生素的LB平板上卻不長(zhǎng)，是怎么回事呢？我感覺(jué)自己圖的板還算均勻

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1樓 2012-02-26 21:20:47

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yeshui

鐵蟲(chóng) (小有名氣)

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引用回帖:

樓: Originally posted by yguang at 2012-02-27 00:28:37:
你要擴(kuò)的片段DH5α里有嗎，這是個(gè)比較愚蠢的問(wèn)題，但好多新手都會(huì)忽略。

沒(méi)有的話，做PCR怎么會(huì)擴(kuò)出來(lái)呢，我就是不明白，請(qǐng)指教啊

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9樓2012-02-27 11:18:49

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天使托

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T.Shen

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【答案】應(yīng)助回帖

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抗生素濃度是否合適？
質(zhì)粒是否丟了？
try again
god bless

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2樓2012-02-26 21:37:07

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biotech_100

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【答案】應(yīng)助回帖

感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1

應(yīng)該是抗生素濃度的問(wèn)題吧！邊上能長(zhǎng)出來(lái)，可能是因?yàn)榕囵B(yǎng)基中抗生素沒(méi)混勻好吧，所以只有邊上能長(zhǎng)。兩次的LB培養(yǎng)基都是同一批倒的平板嗎？

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3樓2012-02-26 22:40:02

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yguang

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【答案】應(yīng)助回帖

感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1

你要擴(kuò)的片段DH5α里有嗎，這是個(gè)比較愚蠢的問(wèn)題，但好多新手都會(huì)忽略。

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4樓2012-02-27 00:28:37

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普通表情龍兔虎貓

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