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小木蟲論壇-學(xué)術(shù)科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » 雙酶切
| 查看: 2240 | 回復(fù): 12 | ||
[求助]
雙酶切
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| 我的片段與質(zhì)粒連接后，轉(zhuǎn)到DH5α中，后提質(zhì)粒，進行雙酶切驗證，和PCR驗證，PCR能出現(xiàn)目的條帶，可是雙酶切切不來是怎么回事呢？不解，請大家多多指教啊 |
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11樓2012-02-29 22:15:25
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木(金幣+1): 鼓勵應(yīng)助 2012-02-29 08:19:28
yeshui(金幣+2): ★有幫助 2012-02-29 20:45:43
小丹木木(金幣+1): 鼓勵應(yīng)助 2012-02-29 08:19:28
yeshui(金幣+2): ★有幫助 2012-02-29 20:45:43
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可能是假陽性，即在涂布的時候，將殘留的為整合入載體的目的基因遺留在平板上（實際上這種可能性非常大），在挑去菌落的時候，將殘留基因一同帶入PCR體系中，由于PCR的高靈敏度，自然會出現(xiàn)目的條帶。 建議重新設(shè)計一對鑒定引物，5'端為目的基因上游質(zhì)粒上的一段序列，3'端為原來目的基因的3‘端，這樣能有效鑒定出攜帶目的基因的克隆 |
8樓2012-02-29 06:51:09
panda73
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yeshui2樓2012-02-27 21:43:34
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3樓2012-02-28 08:16:42
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6樓2012-02-28 22:15:40
7樓2012-02-28 23:45:27
9樓2012-02-29 20:42:48
10樓2012-02-29 20:47:03
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