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keennes木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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[交流]
研究細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，建立細(xì)胞系，是否一定要敲出細(xì)胞內(nèi)源性蛋白分子？ 已有2人參與
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本人從事細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的研究，需要建立一個(gè)新細(xì)胞系，用EGFP標(biāo)記某一蛋白分子，以監(jiān)測(cè)該蛋白涉及到的信號(hào)途徑的信號(hào)傳遞情況。我的建議是：敲出細(xì)胞內(nèi)源性的該蛋白，通過(guò)表達(dá)構(gòu)建載體在細(xì)胞表達(dá)EGFP與該蛋白的融合蛋白，達(dá)到精確定量測(cè)定信號(hào)強(qiáng)弱的目的。但是導(dǎo)師和其他人不同意，認(rèn)為沒(méi)有必要。我也就按照他們的意見(jiàn)來(lái)做，但我給導(dǎo)師明確說(shuō)了保留我的意見(jiàn)。后來(lái)出了問(wèn)題，信號(hào)果然很弱；增加幾倍的激動(dòng)劑，仍然很弱。但他們?nèi)匀徽J(rèn)為敲出內(nèi)源性蛋白沒(méi)有必要。我很迷茫啊，請(qǐng)牛人給個(gè)建議。謝謝了先。 [ 來(lái)自科研家族 生物醫(yī)藥家族 ] |
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