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wskxbxf新蟲 (小有名氣)
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[交流]
6%變性聚丙烯酰胺凝膠總是凝的不好 求指點(diǎn) 急啊 謝謝了 已有22人參與
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最近做AFLP大板 膠用的6%的 總是在梳子的位置凝的不好 6%的工作液是新配的，一般凝固兩個(gè)小時(shí) 求指點(diǎn)啊 是APS的問題？這個(gè)有使用期限嗎 我的配方如下： 丙烯酰胺 15g 甲叉丙烯酰胺 0.75g 尿素 114g 5xTBE 50ml 雙蒸水 100ml 定容至250ml 每次配膠 每36ml的工作液里，加36微升的TEMED和180微升的10%的APS， 不知道大家都加多少TEMED呢？加大點(diǎn)兒量會(huì)不會(huì)好凝一點(diǎn) 最近一直困擾 求指點(diǎn)了 謝謝了 不勝感激啊 |
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7樓2012-03-01 09:11:13
ixido
木蟲 (小有名氣)
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小丹木木(金幣+1): 很詳細(xì)哦 2012-03-01 09:56:09
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小丹木木(金幣+1): 很詳細(xì)哦 2012-03-01 09:56:09
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TEMED加大量會(huì)加速凝，但是凝的速度過快膠會(huì)不勻，影響跑膠的質(zhì)量。APS一般是現(xiàn)用現(xiàn)配，如果一次配的很多的話，要4度存放，但是也不要超過一個(gè)星期。這種東西也不貴，現(xiàn)配最好。 膠不凝的問題，你先試試把梳子洗干凈，吹干，再用。梳子帶水也會(huì)影響梳子附近膠的凝固的。 如果梳子沒有問題，那么你在倒膠之前要好好的混勻，劇烈一點(diǎn)都沒有關(guān)系，一定一定要混勻。 最后還是不行的話，那你需要考慮一下其他試劑的問題了。 |
2樓2012-02-29 22:58:01
starseacow
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3樓2012-03-01 00:11:41
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小丹木木(金幣+1): 鼓勵(lì)交流 2012-03-01 09:56:28
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小丹木木(金幣+1): 鼓勵(lì)交流 2012-03-01 09:56:28
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個(gè)人習(xí)慣： 加大temed和過硫酸銨的用量，使凝膠在半個(gè)小時(shí)左右凝結(jié)最好， 我現(xiàn)在這兩樣的使用量已經(jīng)是教科書的兩倍，在夏季會(huì)加到1.5倍左右 過硫酸銨從來都是現(xiàn)配，從不用過夜的，不管怎么保存； 配個(gè)0.5ml-1ml，隨便稱點(diǎn)，配個(gè)濃度，最后以加入量調(diào)整 [ Last edited by lzgxgz on 2012-3-1 at 07:33 ] |
4樓2012-03-01 07:30:21
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