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shjdyb新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
關(guān)于藥物體外二相代謝研究
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求助：我現(xiàn)在在做一種藥物的體外代謝研究，體內(nèi)以證明其代謝產(chǎn)物是葡糖醛酸結(jié)合和硫酸結(jié)合代謝產(chǎn)物，現(xiàn)在在做體外實(shí)驗(yàn)，一直做不出代謝現(xiàn)象，請(qǐng)求大家?guī)椭?br />
我的孵育體系是100μL：按文獻(xiàn)方法葡糖醛酸體系：微粒體0.1mg/mL, 5mM Mgcl2, 0.03%曲拉通，0.5mM藥物，孵育5min后，3mMUDPGA啟動(dòng)反應(yīng)，孵育60min. 硫酸體系是使用的肝胞質(zhì)液，其他條件同上（未加曲拉通），PAPS啟動(dòng)反應(yīng)。 實(shí)驗(yàn)非常著急，謝謝大家的幫助。 |
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
karl2100(金幣+1): 謝謝！ 2012-03-11 00:08:32
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
karl2100(金幣+1): 謝謝！ 2012-03-11 00:08:32
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有幾個(gè)可能的問(wèn)題，你試一下 首先是做葡萄糖醛酸結(jié)合實(shí)驗(yàn)需要加穿孔劑阿拉霉素，否則底物很難和UGT接觸，影響實(shí)驗(yàn)效果。sigma可買，內(nèi)附說(shuō)明書(shū)。你們加的那個(gè)曲拉通不知道是不是這么作用。 其次是微粒體蛋白濃度是不是有些低，我們用的是0.5 mg/mL的 第三，僅用氯化鎂就可以了嗎，我們用的是PBS 最后，建議一下，可以先用容易發(fā)生葡萄糖醛酸結(jié)合的化合物驗(yàn)證一下實(shí)驗(yàn)體系，我們用的是7-羥基香豆素 希望能幫到你 |
2樓2012-03-06 15:35:28
shjdyb
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謝謝你的回答，我的微粒體濃度寫(xiě)錯(cuò)了是1mg/ml,總的體系是PBS,只是另外加了氯化鎂，關(guān)于穿孔劑從文獻(xiàn)上查的有用曲拉通的，我也做了陽(yáng)性對(duì)照了用的對(duì)乙酰氨基酚，也沒(méi)有代謝。微粒體活性應(yīng)該沒(méi)問(wèn)題，做有些藥物的一相代謝做出結(jié)果了。想問(wèn)一下，你們做體外代謝實(shí)驗(yàn)時(shí)有沒(méi)有發(fā)現(xiàn)哪個(gè)步驟的影響因素比較大啊。試了一個(gè)多月了都沒(méi)有結(jié)果，真的很著急，非常感謝你的幫助。 |
3樓2012-03-10 23:08:05
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