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[求助]
關(guān)于藥物體外二相代謝研究
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求助：我現(xiàn)在在做一種藥物的體外代謝研究，體內(nèi)以證明其代謝產(chǎn)物是葡糖醛酸結(jié)合和硫酸結(jié)合代謝產(chǎn)物，現(xiàn)在在做體外實驗，一直做不出代謝現(xiàn)象，請求大家?guī)椭?br />
我的孵育體系是100μL：按文獻(xiàn)方法葡糖醛酸體系：微粒體0.1mg/mL, 5mM Mgcl2, 0.03%曲拉通，0.5mM藥物，孵育5min后，3mMUDPGA啟動反應(yīng)，孵育60min. 硫酸體系是使用的肝胞質(zhì)液，其他條件同上（未加曲拉通），PAPS啟動反應(yīng)。 實驗非常著急，謝謝大家的幫助。 |
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9樓2012-04-12 12:55:42
mc0326
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【答案】應(yīng)助回帖
★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
karl2100(金幣+1): 謝謝！ 2012-03-11 00:08:32
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
karl2100(金幣+1): 謝謝！ 2012-03-11 00:08:32
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有幾個可能的問題，你試一下 首先是做葡萄糖醛酸結(jié)合實驗需要加穿孔劑阿拉霉素，否則底物很難和UGT接觸，影響實驗效果。sigma可買，內(nèi)附說明書。你們加的那個曲拉通不知道是不是這么作用。 其次是微粒體蛋白濃度是不是有些低，我們用的是0.5 mg/mL的 第三，僅用氯化鎂就可以了嗎，我們用的是PBS 最后，建議一下，可以先用容易發(fā)生葡萄糖醛酸結(jié)合的化合物驗證一下實驗體系，我們用的是7-羥基香豆素 希望能幫到你 |
2樓2012-03-06 15:35:28
3樓2012-03-10 23:08:05
mc0326
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4樓2012-03-10 23:25:11
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