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amq7392鐵桿木蟲 (著名寫手)
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[求助]
關(guān)于脫鹽柱的問題
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| 本人用 Sephadex G-25 Medium柱子脫鹽，出來兩個(gè)蛋白峰是怎么回事？所有的蛋白不是應(yīng)該一起下來嗎？所謂“鹽峰”是什么？我要的產(chǎn)物在第一個(gè)峰，第二個(gè)峰活性很低。另外，請問脫鹽的時(shí)候，用什么尺寸的柱子為好？是細(xì)長一些的還是粗短一些的？26X20cm柱子怎么樣？我樣品一般有十幾毫升。 |
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【答案】應(yīng)助回帖
看天(BioEPI+1): 感謝熱心交流 2012-03-09 16:21:24
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注意下面圖片左上角的注釋，cond=電導(dǎo)，cond%=電導(dǎo)率，這兩個(gè)是表示鹽的，A280是用于測定蛋白質(zhì)的。每兩條豎直的紅線是每一次脫鹽洗脫的循環(huán)，那一次我一共做了很多次，用的是AKTA純化儀，層析柱是GE的desalting，26/10，流速快10ml/min。 我用的樣品是真菌固體培養(yǎng)物用超純水浸泡，離心得到的粗酶液脫鹽。從A280曲線來看，鹽峰之后再次升高，說明粗酶液里也有很多分子量比蛋白質(zhì)小的能引起A280吸收的物質(zhì)。由于A280的原理是測定分子結(jié)構(gòu)中有共軛雙鍵構(gòu)成大Ω鍵的物質(zhì)，所以某些存在此結(jié)構(gòu)的色素也能引起光吸收，而這部分洗脫液確實(shí)是有顏色的，所以可能是分子量較小的色素和其它非蛋白質(zhì)的小分子物質(zhì)，而不是蛋白質(zhì)。因?yàn)槊擕}柱是分子篩，分子尺寸大的蛋白質(zhì)應(yīng)該在鹽之前就被洗脫出來，存在于第一個(gè)峰中。(怎么說我的圖是廣告呢，再發(fā)一次又能發(fā)上來的怎么可能是嘛) |
15樓2012-03-09 03:14:19
★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
amisking(金幣+3): 很專業(yè)！ 2012-03-05 18:26:14
amq7392(金幣+2): ★★★很有幫助 謝謝 2012-03-08 09:54:19
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amq7392(金幣+2): ★★★很有幫助 謝謝 2012-03-08 09:54:19
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2樓2012-03-05 16:10:36
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3樓2012-03-05 16:11:28
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5樓2012-03-05 16:31:39
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