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zxd95至尊木蟲 (著名寫手)
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[求助]
單酶切連接注意事項(xiàng)及洋蔥表皮轉(zhuǎn)化試驗(yàn)
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最近準(zhǔn)備做蛋白質(zhì)定位觀察和BiFC驗(yàn)證蛋白互作，所使用的載體為pSCYNE和pSCYCE（Waters 2004），其中一個(gè)基因（750bp）由于酶切位點(diǎn)限制，只能使用SalI單切，但是做了一次沒(méi)有成功，請(qǐng)教蟲友關(guān)于但酶切連接的注意事項(xiàng)。 此外，載體做好后，是要做EYFP的BiFC，準(zhǔn)備轉(zhuǎn)化洋蔥表皮，由于沒(méi)有這方面的經(jīng)驗(yàn)，請(qǐng)蟲友們提供一些參考資料或親身的實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)。 最后，是我去年8月做了35S:MYB-EYFP和35S:WD40-EYFP的轉(zhuǎn)基因煙草，到現(xiàn)在幾代5次了，不知道還能不能看到熒光，RT-PCR是可以檢測(cè)到的。因?yàn)闊煵萑~片厚，怎樣觀察才好呢？有沒(méi)有蟲友做過(guò)？ |
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liuyu_sdili
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2樓2012-03-06 09:18:45
zxd95
至尊木蟲 (著名寫手)
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4樓2013-05-30 16:02:03
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