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丫頭7976

銅蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

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[交流] 蛋白電泳上樣

各位高手大俠，我昨天做蛋白純化，濃縮，更換buffer，之后跑電泳，上樣，與5XSDS混勻之后，用槍吸上樣，卻發(fā)現(xiàn)吸不上來(lái)，都是氣泡，請(qǐng)問(wèn)有人遇到過(guò)這種情況嗎？這是怎么回事？郁悶

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1樓 2012-03-12 16:04:49

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yangchaoc

金蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)

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你是不是把樣煮干了？

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9樓2012-03-13 22:31:43

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jihuasong

鐵蟲(chóng) (初入文壇)

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丫頭7976(金幣+1): 我怎么會(huì)第一次跑膠，哥哥我怎么也不止跑過(guò)幾十次了，從來(lái)沒(méi)遇到過(guò)這種情況i，就是常規(guī)操作的，不知道今天怎么了，第一次遇到這種情況，難道是表面活性劑太多了？ 2012-03-12 17:00:21

兄臺(tái)第一次跑蛋白膠？樣品直接與5*SDS loading buffer混勻后在沸水中煮十分鐘變性就可以直接上樣了，如果氣泡多你不妨可以離心一下，但一般我們跑膠時(shí)均不會(huì)出現(xiàn)你說(shuō)的那種情況，兄臺(tái)可再參考一些文獻(xiàn)具體看看你的操作步驟有木有什么問(wèn)題~

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2樓2012-03-12 16:20:36

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joan198108

鐵桿木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

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以前做核酸膠的時(shí)候也碰到過(guò)，PCR產(chǎn)物跟loading buffer混勻后用移液器吸打過(guò)程容易生成大量氣泡，導(dǎo)致無(wú)法上樣。記得當(dāng)時(shí)老師給的解釋是樣品中含有蛋白雜質(zhì)，而蛋白比較容易起泡泡。現(xiàn)在是蛋白上樣了，真不知道該怎么解釋了，呵呵呵

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3樓2012-03-12 17:39:22

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biomater

銀蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)

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離心就應(yīng)該沒(méi)氣泡了，用微量加樣器試試。。。。
loadingbuff中的sds加多了？不可能啊。。。

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4樓2012-03-13 09:15:49

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