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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » 關于RNAi實驗
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胡亂走走2011銀蟲 (著名寫手)
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[交流]
關于RNAi實驗 已有5人參與
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本人即將開始做RNAi實驗，對整個實驗流程有所了解，但有些細節(jié)希望過來人指點一二，小女子在此先謝過了。 1、根據(jù)目的基因的ORF序列設計了引物，用來擴增序列中富含siRNA位點的區(qū)域。 陰性對照基因選擇了GFRP。此處我選擇了ORF序列，是否有必要？還是用全長直接來設計就行？因為看到過介紹，說是不要用3‘和5’上游的調(diào)控區(qū)來設計。 2、擴增片段用于體外反轉(zhuǎn)錄。此處有一問題，擴增后的片段是否需要連接轉(zhuǎn)化測序，以確定就是目的序列？ 3、還有RNAi引物的3‘端懸掛核酸，AA或UU，究竟是什么意思？ 再次感謝。 |
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8樓2012-04-29 16:40:32
新手飄過，近期也要開展RNAi的工作了~~ 9樓2012-05-14 16:55:14
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