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胡亂走走2011銀蟲 (著名寫手)
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[交流]
關(guān)于RNAi實(shí)驗(yàn) 已有5人參與
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本人即將開始做RNAi實(shí)驗(yàn)，對(duì)整個(gè)實(shí)驗(yàn)流程有所了解，但有些細(xì)節(jié)希望過來人指點(diǎn)一二，小女子在此先謝過了。 1、根據(jù)目的基因的ORF序列設(shè)計(jì)了引物，用來擴(kuò)增序列中富含siRNA位點(diǎn)的區(qū)域。 陰性對(duì)照基因選擇了GFRP。此處我選擇了ORF序列，是否有必要？還是用全長(zhǎng)直接來設(shè)計(jì)就行？因?yàn)榭吹竭^介紹，說是不要用3‘和5’上游的調(diào)控區(qū)來設(shè)計(jì)。 2、擴(kuò)增片段用于體外反轉(zhuǎn)錄。此處有一問題，擴(kuò)增后的片段是否需要連接轉(zhuǎn)化測(cè)序，以確定就是目的序列？ 3、還有RNAi引物的3‘端懸掛核酸，AA或UU，究竟是什么意思？ 再次感謝。 |
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