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【交流】實(shí)驗(yàn)操作 小trick 已有3人參與
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請(qǐng)各位談?wù)勀銈冊(cè)趯?shí)驗(yàn)中所發(fā)現(xiàn)的或?qū)嶒?yàn)室流傳的 實(shí)驗(yàn)技巧！��！ 或者個(gè)人的實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)或是認(rèn)為很實(shí)用的方法！ 我先來說說：僅是一家之言，拋磚引玉，大家別見笑！也可能說的不對(duì)，僅代表我的觀點(diǎn)。 1、膠回收后PCR： 那時(shí)候碩士時(shí)的老板不是很有錢，小提質(zhì)粒都是自己配的試劑，所以膠回收也買的少。有次晚上做實(shí)驗(yàn)要膠回收然后PCR，發(fā)現(xiàn)沒有盒子了，又不好老借別的實(shí)驗(yàn)室的。很郁悶，師兄推薦一方法很受用： 將膠切下來，凍-20，確保凍透了，取出用封口膜包住膠，用力擠壓，就會(huì)有液體流出，然后吸取液體。稀釋10-100倍，取1微升進(jìn)行PCR，效果還是不錯(cuò)的。 2、做southern，測端粒長度： 標(biāo)探針是用的是P32，因?yàn)榱啃。ㄔ倭看笠膊粫?huì)很多），標(biāo)完后要沉淀離心回收探針（和回收核酸的過程一樣，就是無水乙醇沉淀那個(gè)），肉眼根本看不到，但還是想看看，要不一部小心到了，那就麻煩了。 也是師兄了：說加入糖原就能夠看到探針，果然是那樣的，離心后有一個(gè)小白點(diǎn)，挺明顯的。 可惜糖原的制備方法，我給搞丟了。。。。。。。 3、病毒包裝 挺麻煩的，涉及的太多，只說鋪細(xì)胞部分 現(xiàn)在我知道的有幾種方法：A 加入細(xì)胞后晃前后左右的晃然后突然停！（我們實(shí)驗(yàn)室有的人用的較好） B 加入細(xì)胞后玩命的吹打，將細(xì)胞打散�。ㄎ覀儗�(shí)驗(yàn)室有的人用的較好） C事先用培養(yǎng)基潤板子，然后均勻加入細(xì)胞（曾今用過，但比D稍差點(diǎn)） D充分消化好細(xì)胞，將細(xì)胞直接加入空板，稍晃下鋪滿地面，如鋪滿了不晃也可以的（我做這個(gè)比較受用） 4感染病毒 無論貼壁的還是懸浮的，我都1800轉(zhuǎn)，1.5小時(shí)室溫離心，感染效率是會(huì)高些的。 5爬組織細(xì)胞： 最早是剪了組織，然后貼在鋪了血清的平皿里2h，差不多貼牢點(diǎn)后加入少量的培養(yǎng)基（不能沒過組織塊），放培養(yǎng)箱里培養(yǎng)讓他爬細(xì)胞。但發(fā)現(xiàn)不太好，組織塊易飄。 還是剪碎組織后再用酶消化，然后鋪細(xì)胞瓶里培養(yǎng)較好。細(xì)胞收得多。 [ Last edited by telomerase on 2012-3-19 at 10:21 ] |
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telomerase: , 最好提供些你的實(shí)驗(yàn)技巧什么的，有獎(jiǎng)勵(lì)的噢。。。。。。。 2012-03-19 11:18:57
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2樓2012-03-19 11:13:59
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4樓2012-06-02 09:24:11
gaoyang636
木蟲 (著名寫手)
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5樓2012-06-02 14:55:53
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