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dzwd金蟲 (小有名氣)
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[求助]
tail-PCR問題，求指導
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| 第一次做有特異條帶。同一條件，重復了兩次都沒有特異條帶。是操作問題嗎？應該在哪方面改進？高手指點下吧 |
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 【分子生物】EPI帖 |
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【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
西瓜: 金幣+5, MolEPI+1, 有條有理~普通PCR重復性是不錯，tail-PCR有時候真就看人品。。 2012-03-25 16:13:49
dzwd: 金幣+4, ★★★★★最佳答案, 謝謝啊 2012-03-25 21:57:38
西瓜: 金幣+5, MolEPI+1, 有條有理~普通PCR重復性是不錯，tail-PCR有時候真就看人品。。 2012-03-25 16:13:49
dzwd: 金幣+4, ★★★★★最佳答案, 謝謝啊 2012-03-25 21:57:38
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嗯....... 不是說沒有原因，而是你這種情況，原因可能太多，我們一般認為如果能做出來一次，就說明體系和程序是木有問題的，重復不出來的話，我們會考慮： 1. 引物降解、dNTP降解等，所以會把體系都換一遍 2. 模板也降解，重新提取后再做 3. 機子最近出了問題，換別人的機子試試 4. TAIL-PCR本來一次時間就要3-4個小時、如果你第一輪擴增時間過長，酶能不能抗住也還是問題呢 5. 實在不行，就回去暴吃一頓、蒙頭睡一覺，心情好些再繼續(xù)  PCR本來就是概率時間，就算什么都優(yōu)化了完美了，也不一定100%重復出來哦 |
6樓2012-03-25 09:12:27
atlanticwi
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