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dzwd金蟲 (小有名氣)
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[求助]
tail-PCR問題，求指導(dǎo)
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atlanticwi
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2樓2012-03-24 19:32:22
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3樓2012-03-24 23:38:06
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4樓2012-03-25 08:34:20
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5樓2012-03-25 08:34:54
atlanticwi
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【答案】應(yīng)助回帖
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西瓜: 金幣+5, MolEPI+1, 有條有理~普通PCR重復(fù)性是不錯(cuò)，tail-PCR有時(shí)候真就看人品。。 2012-03-25 16:13:49
dzwd: 金幣+4, ★★★★★最佳答案, 謝謝啊 2012-03-25 21:57:38
西瓜: 金幣+5, MolEPI+1, 有條有理~普通PCR重復(fù)性是不錯(cuò)，tail-PCR有時(shí)候真就看人品。。 2012-03-25 16:13:49
dzwd: 金幣+4, ★★★★★最佳答案, 謝謝啊 2012-03-25 21:57:38
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嗯....... 不是說沒有原因，而是你這種情況，原因可能太多，我們一般認(rèn)為如果能做出來一次，就說明體系和程序是木有問題的，重復(fù)不出來的話，我們會(huì)考慮： 1. 引物降解、dNTP降解等，所以會(huì)把體系都換一遍 2. 模板也降解，重新提取后再做 3. 機(jī)子最近出了問題，換別人的機(jī)子試試 4. TAIL-PCR本來一次時(shí)間就要3-4個(gè)小時(shí)、如果你第一輪擴(kuò)增時(shí)間過長，酶能不能抗住也還是問題呢 5. 實(shí)在不行，就回去暴吃一頓、蒙頭睡一覺，心情好些再繼續(xù)  PCR本來就是概率時(shí)間，就算什么都優(yōu)化了完美了，也不一定100%重復(fù)出來哦 |
6樓2012-03-25 09:12:27
blackrose8089
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7樓2012-03-25 11:36:23
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9樓2012-03-26 22:49:12
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