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[交流]
SDS-PAGE樣品濃縮的方法
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SDS-PAGE樣品需要濃縮大家用的是什么試劑（例如：TCA）？具體步驟？ [ Last edited by chunqizzm on 2012-3-25 at 23:36 ] |
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chunqizzm: 金幣+5 2012-03-27 07:21:19
chunqizzm: 回帖置頂 2012-03-27 07:21:45
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chunqizzm: 回帖置頂 2012-03-27 07:21:45
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這個是最常用的TCA沉淀方法，一般需要蛋白在5μg/ml以上才能沉下來，也就是說大概還有5μg/ml左右蛋白不能沉淀來，這是理論的，實際收率與樣品和操作相關(guān)，如果你樣品比這濃度還低的話可以試下TCA-DOC沉淀，能沉淀1μg/ml以下的蛋白，然后銀染。 TCA-DOC For precipitation of very low protein concentration 1) To one volume of protein solution, add 1/100 vol. of 2% DOC (Na deoxycholate, detergent). 2) Vortex and let sit for 30min at 4C. 3) Add 1/10 of Trichloroacetic acid (TCA) 100% vortex and let sit ON at 4C (preparation of 100% TCA: 454ml H2O/kg TCA. Maintain in dark bottle at 4C.Be careful, use gloves!!!). 4) Spin 15min 4C in microfuge at maximum speed (15000g). Carefully discharge supernatant and retain the pellet: dry tube by inversion on tissue paper (pellet may be difficult to see). [OPTION: Wash pellet twice with one volume of cold acetone (acetone keep at –20C). Vortex and re-pellet samples 5min at full speed between washes]. 5) Dry samples under vacuum (speed vac) or dry air. For PAGE-SDS, resuspend samples in a minimal volume of sample buffer. (The presence of some TCA can give a yellow colour as a consequence of the acidification of the sample buffer; titrate with 1N NaOH or 1M TrisHCl pH8.5 to obtain the normal blue sample buffer color.) |
chunqizzm9樓2012-03-26 22:04:27
3樓2012-03-25 23:43:09
4樓2012-03-26 09:13:32
5樓2012-03-26 09:16:16
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