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fangni新蟲 (正式寫手)
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[求助]
菌液PCR求助
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我做了菌液PCR，一切都很正常，挑菌的時(shí)候先在10微升的滅菌超純水中過一下，完了搖的菌，從10微升中取2微升進(jìn)行PCR，條帶很好，無雜帶，送去測(cè)序卻沒有結(jié)果，說是沒有搖出來，想請(qǐng)教高手這是怎么回事？  |
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
fangni: 金幣+1, ★有幫助 2012-03-27 10:20:51
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
fangni: 金幣+1, ★有幫助 2012-03-27 10:20:51
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可能陽性菌沒張起來或含量較低 PCR是一個(gè)放大實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證不是很準(zhǔn)，最好是提了質(zhì)粒，單雙酶切鑒定了的 我以前圖板子，挑克隆，難免稍掛點(diǎn)克隆周圍的空白瓊脂（圖的轉(zhuǎn)化的連接產(chǎn)物），可能會(huì)引進(jìn)去未連上的目的片段，所以有些克隆P就是陽性的，但酶切鑒定是陰性的（不少呢）。 [ Last edited by telomerase on 2012-3-26 at 16:16 ] |
2樓2012-03-26 16:14:15
fangni
新蟲 (正式寫手)
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3樓2012-03-27 10:20:36
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