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KELL新蟲 (初入文壇)
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常用酶的配制 已有3人參與
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實(shí)驗(yàn)步驟 1.溶菌酶 用水配制成50mg/ml的溶菌酶溶液,分裝成小份并保存于-20℃。每一小份一經(jīng)使用后便予丟棄。 2.蛋白水解酶類 a:鏈霉蛋白酶是從鏈球菌(Streptomyces griseus)中分離到的一種絲氨酸酶和酸性蛋白酶的混合物。 b:自消化可消除DNA酶和RNA酶的污染,經(jīng)自消化的鏈酶蛋白酶的配制方法如下:把該酶的粉末溶解于10mmol./l Tris·HCl(pH7.5)、10mmol/l NaCl中,配成20mg/ml濃度,于37℃溫育1h。經(jīng)消化的鏈霉蛋白酶分裝成小份放在密封試管中,保存-20℃。 c:蛋白酶K是一種枯草蛋白酶類的高活性蛋白酶,從林伯氏白色念球菌(Tritirachium album Limber)中純化得到。該酶有兩個(gè)Ca2 結(jié)合位點(diǎn),它們離酶的活性中心有一定距離,與催化機(jī)理并無直接關(guān)系。然而,如果從該酶中除去Ca2 ,由于出現(xiàn)遠(yuǎn)程的結(jié)構(gòu)變化,催化活性將喪失80%左右,但其剩余活性通常已足以降解在一般情況下污染酸制品的蛋白質(zhì)。所以,蛋白酶K消化過程中通常加入EDTA(以抑制依賴于Mg2 的核酸酶的作用)。但是,如果要消化對(duì)蛋白酶K具有較強(qiáng)耐性的蛋白,如角蛋白一類,則可能需要使用含有1mmol/l Ca2 而不含EDTA的緩沖液。在消化完畢后、純化核酸前要加入EGT(pH8.0)至終濃度為2mmol/L,以鰲合Ca2 。 3.無DNA酶的RNA酶 將胰RNA酶(RNA酶A)溶于10mmol/l Tris·HCl(pH7.5)、15mmol/l NaCl中,配成10mg/ml的濃度,于100℃加熱15min,緩慢冷卻至室溫,分裝成小份保存于-20℃。 來源:everllab實(shí)驗(yàn)管理 |
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