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[交流] 畢赤酵母基因重組時(shí)遇到困難了

目的基因大概800bp左右，同源臂設(shè)置了大概300bp，一直做電轉(zhuǎn)化，兩個(gè)多月了，長(zhǎng)了N多假陽(yáng)性，怎么辦呢，急死了~~~~~~~~~各位對(duì)于做基因敲除有啥好的建議不！

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1樓 2012-03-27 16:47:35

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Petter_JDW

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rainwander: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2012-03-28 08:13:59

同源臂太短了~至少也要600 700~太短了假陽(yáng)性多~~我們做絲狀真菌上下游同源臂在最少1500~~

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2樓2012-03-27 20:39:57

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同意樓上，我協(xié)助學(xué)姐做的基因敲除，也存在這個(gè)問(wèn)題來(lái)著，然后經(jīng)老師指點(diǎn)，解決方法與樓上類(lèi)似。

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3樓2012-03-27 23:15:56

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香蕉寶寶

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2樓: Originally posted by Petter_JDW at 2012-03-27 20:39:57:
同源臂太短了~至少也要600 700~太短了假陽(yáng)性多~~我們做絲狀真菌上下游同源臂在最少1500~~

但是目的基因前后的非編碼區(qū)太短，我看來(lái)一下，最多同源臂只能是500bp

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4樓2012-03-28 12:10:18

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4樓: Originally posted by 香蕉寶寶 at 2012-03-28 12:10:18:
但是目的基因前后的非編碼區(qū)太短，我看來(lái)一下，最多同源臂只能是500bp

那就只有盡量設(shè)計(jì)長(zhǎng)一些~~祝順利

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5樓2012-03-28 12:41:11

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wcy5945

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rainwander: 金幣+1, 鼓勵(lì)交流 2012-03-30 08:32:13

這個(gè)太正常了，一步法就是很多假陽(yáng)性，多篩選多做，遲早會(huì)有對(duì)的，大量的重復(fù)工作

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6樓2012-03-29 23:15:39

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hyacinth326

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我也在做基因敲除，上下游同源臂各1000，還是做細(xì)菌的，到目前為止，轉(zhuǎn)了三次得到的基本都是假陽(yáng)性~~~

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7樓2012-03-30 13:17:57

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王子扶蘇

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我做的同源臂分別是700和500，用醋酸鋰做的化學(xué)轉(zhuǎn)化，兩次就轉(zhuǎn)進(jìn)去了。。。。不過(guò)受體是單倍體

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8樓2012-04-01 10:31:27

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劉玉佩

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9樓2012-04-05 17:08:33

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mm3545

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2樓: Originally posted by Petter_JDW at 2012-03-27 20:39:57
同源臂太短了~至少也要600 700~太短了假陽(yáng)性多~~我們做絲狀真菌上下游同源臂在最少1500~~

同學(xué) 你們做絲狀真菌基因敲除是用的什么方法啊，電轉(zhuǎn)化還是原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化啊，求方法，教教俺啊

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10樓2013-04-16 08:58:45

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