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damaolehehe木蟲 (著名寫手)
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[求助]
HPLC流動相及其配比該如何選��？
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對于一種文獻中沒有HPLC方法報道的化合物如何設(shè)置流動相，該遵循怎樣的規(guī)律進行摸索和嘗試？一頭霧水啊，各位蟲蟲給講講啊~ 而且用不同的流動相發(fā)現(xiàn)峰數(shù)和出峰位置相差很多 怎么判斷峰出沒出全？ 對于反相柱什么時候用甲醇-水什么時候用乙腈-水？ 對于比例應(yīng)該怎樣的順序去摸索？ 從50:50往兩端摸索 還是從兩端向中間摸索呢？ |
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癡夷子皮
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自己摸索條件。 a、樣品性質(zhì) 主要了解化合物的結(jié)構(gòu)、分子量、pKa、UV、樣品濃度范圍、溶解度等。 b、色譜柱選擇 樣品能溶于水-有機混合液的大多數(shù)樣品（特別是中性或非離子化合物），可以選擇反相HPLC，流動相選擇水-有機溶劑，色譜柱可以選擇C18、C8、TMS、苯基、氰基。一般C18用得比較多。 樣品為離子或可電離的化合物（特別是堿性或陽離子樣品），可以選擇離子對HPLC，流動相選擇水-有機溶劑，控制pH的緩沖液和離子對試劑，色譜柱可選擇C18、C8、氰基。一般C18用得比較多。 若反相或離子對HPLC無效時，或樣品不溶于水-有機混合液�？梢赃x擇正相HPLC體系。流動相選擇有機溶劑混合液，色譜柱選擇氰基、氨基、硅膠、二醇基。 c、初始分離條件（相對較好的首要選擇、等度） 色譜柱：150X4.6mm、5um、固定相為C18或C8 流動相：緩沖液-乙腈，緩沖液可選擇純水或緩沖鹽（濃度10~30mM）（若中性樣品，無需使用緩沖鹽）并用酸堿調(diào)控pH（如果pH小于2.5，建議選擇pH穩(wěn)定的色譜柱，避免固定相流失），乙腈起始比例可以選擇80~100%。 離子對等添加劑，開始時請不要使用。流速1.0~2.0ml/min，柱溫35~40℃。 樣品：（最好以流動相溶解樣品）進樣體積小于25uL，進樣量小于100ug。 d、液相方法基本目標 分離度：R大于1.5 分離時間：5~10min較理想 定量：RSD小于2% 壓力：基本要求小于200bar（20M） 針對基本目標，按實際情況進行調(diào)整，譬如流動相實際組分比例，緩沖鹽濃度及pH，柱溫，梯度等 |
2樓2012-03-29 18:39:07
lihuan0525
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