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愛(ài)老虎油920金蟲 (正式寫手)
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【求助】HPLC分析流動(dòng)相選擇問(wèn)題——請(qǐng)教 已有5人參與
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剛在經(jīng)驗(yàn)版塊發(fā)的貼,后來(lái)覺(jué)得分析版塊更貼近我這個(gè)問(wèn)題一點(diǎn),所以也來(lái)這里求助下,不知是否有更多更好的idea,多多益善!呵 最近,用HPLC分析樣品,底物和產(chǎn)物分別是酰胺和酸,我用60%的乙腈水溶液為流動(dòng)相,結(jié)果只在2.5出來(lái)一個(gè)峰,好像這兩種物質(zhì)沒(méi)分開,,,是我的流動(dòng)相極性太大了嗎?我是否應(yīng)該提高乙腈和水的比例,降低流動(dòng)相的極性 來(lái)嘗試下, 請(qǐng)問(wèn),是否我的流動(dòng)相極性太高導(dǎo)致這樣的結(jié)果,這樣處理是否合理,,還有別的其他降低流動(dòng)相極性的方法嗎?? 請(qǐng)各位學(xué)長(zhǎng)姐的指教!不勝感激 我增加了水的比例,用20%乙腈水溶液做流動(dòng)相,還是沒(méi)有出來(lái)酸和酰胺的峰,但原來(lái)那個(gè)峰的保留時(shí)間變長(zhǎng)了,原來(lái)在2.5,現(xiàn)快到4min了,那個(gè)峰開始出現(xiàn)分叉了,是要分開的預(yù)兆嗎?但現(xiàn)在乙腈的比例乙腈很小啦,,是不是要換別的流動(dòng)相了呢?應(yīng)該換什么和什么呢? [ Last edited by 愛(ài)老虎油920 on 2010-8-30 at 12:44 ] |
木蟲 (小有名氣)
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金蟲 (正式寫手)
金蟲 (正式寫手)
金蟲 (正式寫手)
銀蟲 (小有名氣)
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樓主,流動(dòng)相是極性太太小了,就是有機(jī)想的比例太大了,你可以走梯度嘛 10%的乙腈開始吧,15至20分鐘乙腈比例升到50%就行; 水相建議用磷酸鹽緩沖液調(diào)節(jié)pH至3.0左右 如果還不行,那就用可以走100%水的色譜柱試試,或者選長(zhǎng)柱,或者選含碳量高的柱,總之就是為了延長(zhǎng)保留時(shí)間,改善分離效果~~~ 另:酰胺的性質(zhì)一般是比較穩(wěn)定的,不會(huì)輕易發(fā)生分解等反應(yīng) [ Last edited by 883475 on 2010-8-27 at 15:29 ] |
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