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愛老虎油920金蟲 (正式寫手)
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[交流]
【求助】HPLC分析流動(dòng)相選擇問題——請(qǐng)教 已有5人參與
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剛在經(jīng)驗(yàn)版塊發(fā)的貼，后來覺得分析版塊更貼近我這個(gè)問題一點(diǎn)，所以也來這里求助下，不知是否有更多更好的idea，多多益善！呵 最近，用HPLC分析樣品，底物和產(chǎn)物分別是酰胺和酸，我用60%的乙腈水溶液為流動(dòng)相，結(jié)果只在2.5出來一個(gè)峰，好像這兩種物質(zhì)沒分開，，，是我的流動(dòng)相極性太大了嗎？我是否應(yīng)該提高乙腈和水的比例，降低流動(dòng)相的極性 來嘗試下， 請(qǐng)問，是否我的流動(dòng)相極性太高導(dǎo)致這樣的結(jié)果，這樣處理是否合理，，還有別的其他降低流動(dòng)相極性的方法嗎？？ 請(qǐng)各位學(xué)長姐的指教！不勝感激 我增加了水的比例，用20%乙腈水溶液做流動(dòng)相，還是沒有出來酸和酰胺的峰，但原來那個(gè)峰的保留時(shí)間變長了，原來在2.5，現(xiàn)快到4min了，那個(gè)峰開始出現(xiàn)分叉了，是要分開的預(yù)兆嗎？但現(xiàn)在乙腈的比例乙腈很小啦，，是不是要換別的流動(dòng)相了呢？應(yīng)該換什么和什么呢？ [ Last edited by 愛老虎油920 on 2010-8-30 at 12:44 ] |
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2樓2010-08-27 08:15:29
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chiraler(金幣+1):thanks for your response 2010-08-31 18:06:55
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3樓2010-08-27 08:40:07
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4樓2010-08-27 10:35:47
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5樓2010-08-27 14:58:37
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6樓2010-08-27 15:02:32
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樓主，流動(dòng)相是極性太太小了，就是有機(jī)想的比例太大了，你可以走梯度嘛 10%的乙腈開始吧，15至20分鐘乙腈比例升到50%就行； 水相建議用磷酸鹽緩沖液調(diào)節(jié)pH至3.0左右 如果還不行，那就用可以走100%水的色譜柱試試，或者選長柱，或者選含碳量高的柱，總之就是為了延長保留時(shí)間，改善分離效果～～～ 另:酰胺的性質(zhì)一般是比較穩(wěn)定的，不會(huì)輕易發(fā)生分解等反應(yīng) [ Last edited by 883475 on 2010-8-27 at 15:29 ] |
7樓2010-08-27 15:26:28
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