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七AND七

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[交流] 做過(guò)多糖除蛋白的請(qǐng)進(jìn) 已有17人參與

最近在做海藻多糖的結(jié)構(gòu)分析，其中要對(duì)粗多糖除蛋白，選擇Sevag方法，但是發(fā)現(xiàn)重復(fù)了幾次之后再加Sevag試劑劇烈振搖后還是呈乳白色狀態(tài)，分液漏斗沒(méi)辦法分離只能高速離心才能分離而且還發(fā)現(xiàn)水層越來(lái)越少了……請(qǐng)問(wèn)這是什么原因？我都懷疑那些是不是都是糖蛋白而沒(méi)有多糖��！

除蛋白時(shí)多糖液濃度是不是應(yīng)該烯一點(diǎn)有利于蛋白的出去？或者還有什么更有效率的方法？

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1樓 2012-04-02 18:13:19

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引用回帖:

9樓: Originally posted by zhxl81920 at 2012-04-05 17:04:08:
氯仿和正丁醇的比例，以及與多糖的比例，攪拌大概30min后分液漏斗靜置一段時(shí)間，中間的是變形的蛋白層分液可以除去。或者用酶處理后透析，也有有三氯乙酸的，可以試試你的樣品那個(gè)比較合適。

你好！加了Sevag試劑后是用攪拌子攪拌么不用在分液漏斗中劇烈振搖么？我振搖了之后呈白色狀態(tài)，我想是乳化了。然后我又去離心看看，結(jié)果就只有兩層（上層多糖，下層就全部是白色的）沒(méi)看到所謂的變性蛋白。攪拌時(shí)間一定要很長(zhǎng)么？我差不多就一兩分鐘。酶解后可以直接透析能除掉蛋白么？

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10樓2012-04-05 19:09:26

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leecius: 金幣+1, 謝謝參與！ 2012-04-03 08:02:33

首先要把多糖溶解了，如果不報(bào)多糖溶解了，在離心時(shí)多糖會(huì)沉淀
再加Sevag試劑劇烈振搖后還是呈乳白色狀態(tài)，這是乳化現(xiàn)象，可以冷凍破乳，

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2樓2012-04-02 22:59:31

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我是把多糖全部溶解了的，還有就是我看文獻(xiàn)上說(shuō)加了Sevag試劑后振搖完了會(huì)分成三層，上層多糖下層有機(jī)試劑中間白色層為變性蛋白質(zhì)。為什么我離心完就只有兩層呢，上層是多糖下層是全部白白的，難道我的多糖里的蛋白含量很高？不解

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3樓2012-04-03 09:54:14

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xiaoxiao270: 金幣+1, 3Q 2012-04-04 22:09:03

中間層沒(méi)有可能代表沒(méi)有變性蛋白了，下層冷凍后再看看，可能是變形蛋白，還可能是乳化，還可能含有化合物

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4樓2012-04-03 11:52:36

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