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多糖的除蛋白問題
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| 大家好： 想問大家一個(gè)問題，我在對(duì)水提的蟲草多糖進(jìn)行除蛋白時(shí)，除蛋白前紫外檢測(cè)的時(shí)候200-400nm之間沒有峰吸收 ，曲線很平穩(wěn)，只是快要到200即接近縱軸的時(shí)候曲線急劇的上升。之后我又用胰蛋白酶處理了三次，離心時(shí)有少量的白色沉淀，然后我又用savege法處理了4次，此時(shí)中間層看不到有白色絮狀物，我認(rèn)為蛋白除干凈了，可紫外的時(shí)候曲線形狀和除蛋白前一樣，沒有變化，只是在260nm和280nm處的吸光度變大了。之前我的材料用80%的乙醇回流提取過，可是我查了80%的乙醇只能除去一些色素、小分子的化合物、單糖和一些低聚糖等，不會(huì)除去蛋白的呀，處理前和處理后分別茚三酮顏色反應(yīng)也不明顯，要說沒有蛋白不可能的呀，那我savege法處理的時(shí)候中間那絮狀物是什么呀？是不是我操作錯(cuò)了還是？希望有做過的同仁們能給指點(diǎn)一下，麻煩大家了！ |
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2樓2013-06-20 11:11:53
3樓2013-06-20 20:40:44
藍(lán)龍教主
金蟲 (正式寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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除蛋白的過程會(huì)損失40%左右的粗提物，仔細(xì)想想，植物來源的多糖里面是不可能含有這么多的蛋白的。當(dāng)?shù)鞍兹コ臅r(shí)候，我以前采用了蛋白酶與正丁醇，氯仿合用的辦法清除。 多糖的分離純化是個(gè)緩慢的過程，但是個(gè)人認(rèn)為，可能糖蛋白還是有一定活性的，糖蛋白應(yīng)該還保留有蛋白的活性，那么可以試試鹽析，或者分離蛋白的方法，這些東西我沒有試過，但是我覺得應(yīng)該具有可行性。 在鹽溶液中，多糖的溶解度還是比較好的 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
4樓2013-06-20 23:35:55
送紅花一朵 |
非常謝謝，我把多糖溶解在水里，我沒有木瓜蛋白酶，用的是胰蛋白酶，它的水解條件好像是PH=7.8-8.1，我沒有調(diào)節(jié)PH，直接在50℃水浴4小時(shí)，酶法我處理了3次，然后4次SEVAG法處理，就看不到變性蛋白了，而且我的溶液顏色還淺了很多，透亮透亮的，我想問下此法是不是還可以出去部分色素，還是我的糖少了？我昨天重復(fù)做了一遍，除蛋白前260nm和280nm處有峰，很小，除蛋白后平了很多，是不是證明蛋白除去了很多？還是要求此處的吸收度要小于某個(gè)值？我的縱坐標(biāo)最大值設(shè)置的是2.5，這個(gè)縱坐標(biāo)最大值設(shè)置有什么具體的規(guī)定嗎？非常謝謝！ |
5樓2013-06-21 16:46:51
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